Name: טכניקות מעבדה אספטיים: העברות נפח עם טפטפות ו Micropipettors סרולוגיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: למד טכניקות מעבדה אספטיות להעברת נפחים בדיוק באמצעות טפטפות סרולוגיות ומיקרופיפטורים. שיטות אלו ממזערות זיהום ומבטיחות הצלחה ניסיונית במחקר מיקרוביולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

תודה מיוחדת קורי סנדרס על עיצובים Iroc להכנת איורים וכדי קריס Reddi ב-UCLA להקמת תרבויות מדגם של דמויות. המימון לפרויקט זה סופק על ידי HHMI (HHMI גרנט מס &#39;52006944).

<ol><li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarker%2C+K+%22At+the+Bench%3A+A+Laboratory+Navigator%22">At the Bench: A Laboratory Navigator</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. New York. (1998).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+Microbiological+And+Biomedical+Laboratories+%28BMBL%29%22">Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</a>. , 5th Ed, US Department of Health and Human Services (DHHS), Centers for Disease Control and Prevention (CDC) and National Institutes of Health (NIH), U.S. Government Printing Office. Washington DC. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm">http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm</a> (2009).</li>
<li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D(2008).</li>
<li>Coté, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique+for+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3(2001).</li>
<li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22RAP+Publication%22%5BJournal%5D)">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li>
<li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pipetting%3A+A+Practical+Guide%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li>
<li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJordan%2C+T+%22RESEARCH%3A+National+Genomics+Research+Initiative+Phage+Resource+Laboratory+Manual%22">RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</a>. , Howard Hughes Medical Institute. (2008).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning+-+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning - A Laboratory Manual</a>. , 3rd Ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. 978-087969576 (2001).</li>
<li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeidman%2C+LA+%22Basic+Laboratory+Methods+for+Biotechnology%3A+Textbook+and+Laboratory+Reference%22">Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference</a>. , Prentice Hall, Inc. Upper Saddle River, New Jersey. (2000).</li>
<li>Pipettes, Calibration & Repair Service - Pipette.com [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx">http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx</a> (2012).</li>
<li>On-Line Resources for Biology: Table of Contents [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html">http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html</a> (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22PIPETMAN+P+User%27s+Guide%22">PIPETMAN P User's Guide</a>. , Gilson Inc. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf">http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf</a> (2012).</li>
<li>Sterile Technique - Laboratory Wiki [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique">http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique</a> (2012).</li>
<li>Air displacement pipette - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette">http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette</a> (2012).</li>
<li>Disinfectant - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant">http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant</a> (2012).</li>
</ol>

אין לי מה לחשוף.

הטכניקה אספטי מתייחס למערכת של נהלים שגרתיים לעשות כדי למנוע פתרונות סטריליים ותרבויות מלהפוך מזוהמים על ידי מיקרואורגניזמים לא רצויים במעבדה. טכניקות אלה חיוניים לניסויים הדורשים התאים גוברת. אף על פי הגדרת העבודה כי הוא סטרילי לחלוטין לא ניתן להשיג, נהלים כגון חיטוי משטחים מעבדה, יצירת שדה סטרילי באמצעות מבער בונזן, הגבלת החשיפה של תרבויות התקשורת הסיר את המיכסה לאוויר, עיקור חומרים כגון בקבוקים, צינורות טפטפות זכוכית, ועל הימנעות ממגע של מכשירים סטריליים עם לא סטריליים משטחים מפחית את האפשרות של זיהום פתרונות ותרבויות בניסוי. המטרה היא נהלים אלה זהירות להפוך לטבע שני, זה מגיע עם הכשרה בפועל תוך כדי עבודה במעבדה. נפח העברות עם פתרונות ותרבויות סטריליים באמצעות מכשירים כגון בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות ו מיקרופוןropipettors הם אחד סוגים רבים של טכניקות שגרתיות שנעשו במעבדה. יישומים ניסיוניים שונים דורשים מכשירים המסוגלים להעביר שונים, כמויות מדויקות עדיין ומדויק. בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות משמשים במיקרוביולוגיה מעבדות להכנת תרביות תאים הדורשים הכנות מדיה מעורבים כרכים למיליליטר, ואילו micropipettors חיוניים ניסויים בביולוגיה מולקולרית, כי צריך כמויות רק microliter של פתרונות. כאשר טכניקה אספטי הוא התאמן עם מכשירים אלה, זיהום ממוזער במהלך העברת נפח ללא קשר לכמות של נוזל או סוג של ניסוי. אמנם לא דנו בפרוטוקול זה, אחד באמצעים אחרים נפוצים על מנת למנוע זיהום היא לעבוד בתוך ברדס למינרית הזרימה (איור 10). ציוד זה הוא קריטי עבור התרבות רקמות ניסויים שבוצעו עם מיקרואורגניזמים המסווגים BLS-2 ומעלה. מכסה המנוע זרימה למינרית מכיל (HEPA יעילות גבוההחלקיקי האוויר) מסנן מסיר חומרים מזהמים הנישאים באוויר מן האוויר זורם לתוך מכסה המנוע תוך מניעת בלי פילטר אוויר מהחדר מ המחלחל סביבת העבודה. ראוי לציין, מבער בונזן לא ניתן להשתמש בו בתוך מכסה המנוע זרימה למינרית בגלל החום מהאש משבש את זרימת האוויר חיוני לפעולה התקינה של מכסה המנוע. זה בדרך כלל מועיל כדי לבדוק את איכות הטכניקה aseptic שלך בעת ביצוע הניסויים. כדי לאשר את פתרונות התקשורת והתרבות לא מקבלים מזוהמים במהלך המניפולציה, תמיד להכין בקרת שלילית. לדוגמה, אם הכנת צינורות של מרק לצמיחה של תרבויות חיידקים, לא לחסן 1 ולהשאיר רק צינור התקשורת סטריליים. דגירה בינוני לצד צינורות מחוסן ואז לבדוק את צינור השליטה uninoculated סימנים של זיהום כגון עכירות מן הצמיחה של תאים לא רצויים שהוכנסו בטעות לתוך הצינור. אם הצינור השליטה מזוהם, שפופרת הניסויסביר להניח מזוהמים גם כן, הניסוי יהיה צורך לחזור. אמצעים אלה זהירות צריך להיעשות בכל ניסוי.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> LB מרק </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> מתכון זמינה גם התייחסות 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> TE חוצץ: </td></tr><tr><td> EDTA הרכב: dihydrate מלח </td><td> סיגמא </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> סיגמא </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc </td><td> 8504 </td><td> מחטא </td></tr><tr><td> אתנול </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> A406 </td><td> לשימוש חומר חיטוי, להכין 70% (V / V) עם מים מזוקקים </td></tr></tbody></table>

טכניקות מעבדה אספטיים: העברות נפח עם טפטפות ו micropipettors סרולוגיות

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

מיקרואורגניזמים נמצאים בכל מקום - באוויר, אדמה, גוף האדם, כמו גם על משטחים דוממים כמו ספסלים מעבדה ומקלדות מחשב. המצאות בכל מקום של חיידקים יוצר היצע רב של מזהמים פוטנציאליים במעבדה. כדי להבטיח את הצלחת הניסוי, מספר מזהמים על משטחים ציוד העבודה חייב להיות ממוזער. המשותף בין ניסויים רבים במיקרוביולוגיה טכניקות הקשורות מדידה והעברת תרבויות המכילים תאים חיידקיים או חלקיקים נגיפיים. כדי לעשות זאת בלי קשר לא סטריליים משטחים סטריליים או זיהום התקשורת דורש (1) הכנת סביבת עבודה סטרילית, (2) בדיוק ההגדרה ומדויק לקרוא מכשירים להעברת אספטי של נוזלים, ו (3) שצריך לתמרן מכשירים, תרבויות צלוחיות, בקבוקים צינורות בתוך שדה סטרילי. למידה הליכים אלה דורשת אימון ותרגול. בתחילה פעולות צריך להיות איטי ומחושב, ונשלט במטרה להיות עבור T אספטייםechnique להיות טבע שני כאשר עובדים על הספסל. כאן אנו מציגים את הפעולות למדידת נפח באמצעות בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות ו micropipettors בתוך שדה סטרילי נוצר על ידי מבער בונזן. הכרכים נע בין מיקרוליטר (μl) כדי מיליליטר (מ&quot;ל), תלוי במכשיר שימוש. הנוזלים מועברים בדרך כלל כוללות מרק סטרילית או תמיסות כימיות, כמו גם תרבויות חיידקים ומניות הפאג. על ידי ביצוע הליכים אלה, התלמידים צריכים להיות מסוגלים: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבוד בתוך השדה הסטרילי שנוצר על ידי להבה מבער בונזן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משתמשים בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות מבלי להתפשר על עקרות המכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב נוזלים עם בטפי להחדרת נוזלים סרולוגיות, דווקא קריאת ספרים מכויל על ידי יישור המניסקוס שהוקמה על ידי נוזל על סימני סיום על פיפטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על תרבות בקבוקים, צלוחיות, צינורות וכובעים שלהם סטריליים במהלך העברת נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זיהוי יישומים שונים עבור PIP סרולוגית פלסטיק לעומת זכוכיתettes. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דיוק המדינה מגבלות micropipettors. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיר במדויק ובאופן מדויק כרכים על micropipettors. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדעת איך להשתמש נכון התחנה הראשונה והשנייה על micropipettor כדי לשאוב ולהעביר כמויות נכונות. </li></ul>

כאשר עובד במעבדה, חובה לצמצם מקורות זיהום. הטכניקה אספטי מתייחס נהלים המאפשרים העברה של תרבויות ריאגנטים תוך הימנעות ממגע עם משטחים לא סטריליים. בטפי להחדרת נוזלים סרולוגית ו micropipettors משמשים למדידת כמויות מדויקות מבלי להתפשר על עקרות של פתרונות המשמשים בניסויים.

טכניקות מעבדה אספטיים: העברות נפח עם טפטפות ו Micropipettors סרולוגיות

מיקרואורגניזמים נמצאים בכל מקום - באוויר, בקרקע ובגוף האדם, וכן על משטחים דוממים כגון סביבת עבודה במעבדה ומקלדות של מחשבים. ה...

הדגמה זו מציגה טכניקות מעבדה אספטית להעברת נפחים באמצעות פיפטות סרולוגיות ומיקרופיפטות על שולחן המעבדה. יש לעבוד בתוך השטח הסטרילי שנוצר על ידי להבת מבער בנזן. בחר את מכשיר העברת הנפחים המתאים ליישום.לאחר מכן, השתמש בהם כראוי מבלי לפגוע בסטריליות שלהם, תוך שמירה על סטריליות של ריאגנטים וחומרי תרבית, ושאיבת נוזלים בדיוק רב ובאופן משולב. הליכים אלו חיוניים לצמצום מקורות זיהום ולהבטחת דיוק בניסויים בסיסיים. בתחילה, קיים קושי בכיוון מדויק וקריאה נכונה של המכשירים, וכן בתיאום התנועות מול המכשירים וחומרי המעבדה מבלי לפגוע בסטריליות של הנוזלים המועברים.תרגול טכניקה ספטית במעבדה הוא חיוני להצלחת הניסוי בעבודה עם דגימות חיות, לכן הקדישו את הזמן ללמידת נהלים אלו עד שיהפכו לטבע שני. בעת העבודה על שולחן המעבדה, ד"ר Chris Reddy, רכז המעבדה שלי, ידגים את הפרוטוקולים. יש לשטוף תמיד את הידיים ביסודיות עם סבון אנטיספטי ומים חמימים לפני תחילת כל הליך מעבדתי. ראשית, הרטיבו את הידיים תחת מים חמימים זורמים.לאחר מכן, יש למרוח את הסבון ולהפיצו היטב בתנועות נמרצות. שפשפו את הידיים תוך יצירת חיכוך בכל המשטחים, כולל האגודלים, גב האצבעות, גב כפות הידיים ותחת הציפורניים. לאחר מכן, שטפו היטב כדי להסיר שאריות סבון וייבשו באמצעות מגבות נייר ממתקן.לבסוף, באמצעות נייר סופג נקי, סגרו את הברז ופנו את שולחן העבודה במעבדה. לאחר מכן, הוציאו מגבון חיטוי לח מהמכל ונגבו את כל השטח. הניחו לחומר החיטוי להתאדות באמצעות תאורת הצתה.מבער בנזן. כווננו את הלהבה כך שייווצר קונוס כחול במרכז. סדרו את כל הציוד הדרוש לפרוצדורה בסמוך לאזור הסטרילי של ספסול המעבדה.בנוסף, ודאו שכל החומרים מסומנים כראוי. קיימים סוגים רבים של פיפטות סרולוגיות, מפלסטיק או מזכוכית, חד-פעמיות או רב-פעמיות, עם פקק או ללא פקק. הגדלים השונים מכויילים עם פקקים המשמשים כמחסום למניעת מילוי יתר של הפיפטה.שימו לב שפיפטות סרולוגיות מכויילות גם הן בשתי דרכים. פיפטות TD המסומנות בטבעות כפולות בחלקן העליון מכויילות כך שנפח הקצה אינו נמסר. הדבר אינו מוצג כאן, אך פיפטות TC חייבות להינשף (blown out) מכיוון שהן מכויילות למסירת כל הנפח. תוך שימוש בטכניקה אספטית עם פיפטה סרולוגית מפלסטיק סטרילית העטופה בנפרד, התחילו מהקצה האטום והסירו בזהירות את הנייר.אין להסיר את כל השרוול. במקום זאת, הגנו על קצה ידית הפיפטה – רק על החלק העליון של הפיפטה שמעל סימוני המדידה – וחברו עזר לפיפטה, כגון פומפה או פיפטור, לקצה העליון של הפיפטה הסרולוגית. החזיקו את העזר לפיפטה ביד אחת והסירו את שרוול הנייר מהפיפטה הפלסטית ביד השנייה.עבור פיפטות סרולוגיות מזכוכית המאוחסנות במכלים ממתכת, שחררו את החלק העליון של המכל והסירו את המכסה; עקרו באמצעות להבה את הקצוות הפתוחים של המכסה ושל המכל. לאחר מכן, הניחו את המכסה על צדו על משטח העבודה החיטוי. החזיקו את המכל במצב אופקי ונערהו כך שקצותיהן של פיפטה אחת או שתיים יבלטו החוצה.השאירו בלטה של כאינץ'. הניחו את המיכל על צדו והוציאו פיפטה אחת מבלי לגעת בשאר הפיפטות. שמרו על קצה הפיפטה נקי ממגע עם ידיים ומשטחים שאינם סטריליים.המשיכו בחיבור של עזר הפיפטה. לאחר מכן, העבירו את השליש התחתון של פיפטת זכוכית דרך החרוט הכחול בלהבת מבער בונסן למשך אחת עד שלוש שניות. כעת הסירו את הפקק של הבקבוק המכיל מצע סטרילי.החזיקו את הבקבוק בין קמיץ האצבע לכף היד של יד אחת, תוך הפעלת עזר הפפיטה באמצעות האגודל, האצבע והאצבע האמצעית של אותה יד. ביד השנייה, החזיקו את הבקבוק בזווית של 45 מעלות והעבירו את שפת הבקבוק דרך הלהבה של מבער בנזן. הכניסו את קצה הפפיטה הסטרילי לתוך המצע. לאחר מכן, בצעו שאיבה באמצעות עזר הפפיטה תוך בקרת הזרימה לפי סימני המדידה.עקבו אחר הנפח שנשאב לפיפט כדי לקרוא את הנפח במדויק. החזיקו את הפיפט בצורה אנכית והביטו במניסקוס הנוזל ישירות בגובה העיניים. פעם נוספת, העבירו את שפת הבקבוק דרך להבת מבער בונסן.לאחר מכן סגרו את הפקק. הניחו את בקבוק המצע בצד. לאחר מכן קחו מבחנה סטרילית ובאופן אספטי.הסר את הפקק כפי שתואר קודם לכן. צור סביבת עבודה סטרילית על ידי שריפת שולי השפופרת בלהבה. העבר את המצע מהפיפט לשפופרת תוך בקרה על זרימת הדגימה כדי למנוע נתזים.עקרו את שפת המבחנה בעזרת להבה. שוב, החזירו את הפקק והניחו את המבחנה בצד. כעת הסירו את עזר הפפיטה, השליכו פפיטות פלסטיק למכל ייעודי לפסולת חדה, והטבילו פפיטות זכוכית בתמיסת אקונומיקה 10%.פיפט מיקרו מאפשר מדידה וחלוקה מדויקת של נפחים זעירים באמצעות מכשירים בגדלים שונים עבור טווחי נפחים ספציפיים. מבחנות וטיפים פלסטיים שעברו סטריליזציה מראש. השתמש גם במטלית חיטוי לחה כדי לנקות את פיפטות המיקרו.הערה.ה-Volter מציג שלושה מספרים שיש לפרש ביחס לסוג המיקרופיפט, כאשר הדיוק משתקף בחלוקה הקטנה ביותר. לדוגמה, ה-P 20 משמש לנפחים שבין 2.0 ל-20.0 מיקרוליטר. המספר העליון בשחור מייצג עשרות של מיקרוליטר.המספר השחור השני מציין את הנפח במיקרוליטרים. המספר האדום מסמן עשיריות של מיקרוליטר, כך שכל סימן של חלוקה שווה למרווח של 0.02 µL. ראשית, סובבו את כפתור הכיוונון כדי להגדיר את נפח הדיספנסר כפי שמופיע במד הנפח המספרי.בעת הורדת הגדרת הנפח במיקרופיפטור, סובב לאט את גלגל האגודל כלפי מטה עד לסימון המדרגה. בעת הגדלת הגדרת הנפח, סובב כלפי מעלה כך שתעבור את סימון המדרגה הרצוי בשליש סיבוב. לאחר מכן, סובב לאט את גלגל האגודל כלפי מטה כדי להגיע לנפח המתוכנן.השתמשו תמיד בטיפים מפלסטיק סטריליים לשימוש חד-פעמי. התקיפו טיפ בצורה הדוקה על קצה גליל המיקרופיפטור. לחצו כלפי מטה וסובבו מעט כדי להבטיח איטום הרמטי.החזיקו את המיקרופיפט במצב אנכי. שימו לב כי למיקרופיפט יש שלושה מצבים: מצב מנוחה, עצירה ראשונה ועצירה שנייה.לחץ על כפתור הדחיפה של הבוכנה ממצב המנוחה עד לעצירה הראשונה כדי לדחוס אוויר בנפח השווה לנפח שהגדרת. כעת, טבול את הטיפ בנוזל תוך כדי לחיצה על כפתור הדחיפה עד לעצירה הראשונה. שחרר את כפתור הדחיפה באיטיות כדי לשאוב את הנוזל לתוך הטיפ.כאשר לחצן הלחיצה מגיע למצב המנוחה, המתינו זמן מספיק כדי שהנוזל יישאב אל תוך הטיפ. לאחר מכן, הוציאו את הטיפ מהנוזל. ודאו באופן ויזואלי את כמות הנוזל שנשאבה לטיפ, וודאו שאין בועות אוויר.הנח את הטיפ בזווית של 10 עד 45 מעלות כנגד דופן המבחנה אליה מוזרם הנוזל. כעת, לחץ באיטיות על כפתור הדחיפה של הבוכנה עד למעצור הראשון, כדי להוציא את הנוזל.לאחר רגע, לחצו על כפתור הדחיפה עד לעצירה השנייה כדי להוציא שאריות נוזל. לאחר מכן, הוציאו את הטיפ מהנוזל ושחררו את הבוכנה חזרה למצב המנוחה. לבסוף, השליכו את הטיפים למכל ייעודי לפסולת חדה על ידי לחיצה על כפתור הפליטה של המיקרו-פיפט.ראשית, כבו את מבער בנזן. לאחר פינוי כל הציוד והריאגנטים, נגבו את המשטחים החיצוניים של כלי המעבדה במטלית חיטוי לפני העברתם למקום אחסונם. לאחר מכן, הניחו זכוכיתיות מזוהמות וחומרים מסוכנים במיכלי הפסולת המתאימים.יש לנגב שוב את כל אזור העבודה, ולאפשר לחומר החיטוי להתאדות. לבסוף, יש לשטוף את הידיים היטב בסבון אנטיספטי ובמים חמים. ללא שימוש בטכניקה אספטית, התרביות עלולות להידבק בזיהומים ולהוביל לעיכוב בניסויים.העברה אספטית של נוזלים באמצעות פיפטות סרולוגיות היא חיונית להרביית תרביות חיידקים טהורות, כגון הכנה זו של 25 milliliter של e coli. בנוסף, פיפטות סרולוגיות מקלות על העברה אספטית של נוזלים למבחנות סטריליות. דוגמה זו מציגה תרבית טהורה לעומת תרבית מזוהמת של e coli בהעברה נקודתית של מצע גידול למבחנות.לעיתים נדרשים נפחים מדויקים. במקרה זה, ניכרת העברה לא מדויקת של מצע. דוגמה זו מראה נפח שגוי של בופר שהועבר.במקום להעביר 12.5 µL, הסטודנט העביר 125 µL. למרות שהמספרים הוגדרו באופן זהה על גבי בורר הנפח, נבחר מיקרו-פיפט לא מתאים למשימה. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו ידע מעשי על יישום טכניקה סטרילית בפרוצדורות מעבדה שגרתיות, כגון העברת תמיסות ותרביות באמצעות פיפטות סרולוגיות ומיקרו-פיפטות, מבלי לפגוע בסטריליות שלהן.המטרה היא שהליכי זהירות, כגון שריפת זכוכית, טיפי פיפט, מבחנות תרבית ובקריקים, כמו גם עבודה בתוך גבולות של שטח סטרילי על שולחן המעבדה, יהפכו להרגל בכל ניסוי. כמו כן, חיוני למדוד ולחלק נפחים מדויקים בעת ביצוע ניסויים. למידה של שימוש נכון במכשירי העברת נפחים אלו תשפר את מהימנות התוצאות הניסוייות.

aseptic-laboratory-techniques-volume-transfers-with-serological

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאשר עובדים עם התקשורת ריאגנטים המשמשים מיקרואורגניזמים תרבות, הטכניקה aseptic חייב להיות מתורגל כדי להבטיח זיהום ממוזער. מגוון שיטות ציפוי משמשים באופן שגרתי כדי לבודד, להפיץ, או חיידקים למנות ו הפאג, אשר כולם לשלב נהלים השומרים על עקרות של חומרים ניסיוניים.

טכניקות מעבדה אספטיים: שיטות ציפוי

חיידקי ליסטריה הוא אורגניזם מודל ללימוד המערכת החיסונית ורגישות גנטית תאיים לחיידקים בעכברים. שיטה זו מאפשרת למדוד עומס חיידקים ליצור תא בודד השעיות של הכבד והטחול מעכברים לניתוח FACS לקבוע שינויים בתאי המערכת החיסונית עקב זיהום ליסטריה.

מדידת עומס בקטריאלי ותגובות החיסון של עכברים נגועים עם חיידקי ליסטריה</em

העברה מתא לתא של אגרגטים חלבונים, או זרעים פרוטאופתיים, עשויה להיות הבסיס להתקדמות הפתולוגיה במחלות ניווניות. כאן, מתוארת בדיקת ציטומטריית זרימת FRET חדשה המאפשרת זיהוי ספציפי ורגיש של פעילות זריעה מדגימות רקומביננטיות או ביולוגיות.

איתור רגיש של פעילות זריעת Proteopathic עם סריג cytometry הזרימה

פרוטוקול זה מתאר כיצד לחסן עכברי C57BL/6J בזן EGD של ליסטריה מונוציטוגנס (L. monocytogenes) ולמדוד תגובות אינטרפרון-γ (IFN-γ) על ידי תאי הרג טבעי (NK), תאי T הורגים טבעיים (NKT) ולימפוציטים מסוג T אדפטיביים לאחר הדבקה. פרוטוקול זה מתאר גם כיצד לבצע מחקרי הישרדות בעכברים לאחר הדבקה במינון LD50 שונה של הפתוגן.

זיהום הניסיון עם<em&gt; חיידקי ליסטריה</em&gt; כמודל תגובות לימוד מארח אינטרפרון-γ

המטרה של פרוטוקול זה היא לזהות הלימפה תאי אנדותל אוכלוסיות בתוך הכבד באמצעות סמנים המתואר. אנו מנצלים collagenase הרביעי ואת DNase לקמץ עדין של רקמות, בשילוב עם cytometry זרימה, לזהות אוכלוסייה ברורים של תאי אנדותל הלימפה.

העיכול של הכבד מאתר של ניתוח Cytometric זרימת הלימפה תאי אנדותל

נדגים את השימוש צפיפות מקוטע הדרגתיים כדי להפריד בין אוכלוסיות חיידקים המבוססת על ייצור כמוסה. שיטה זו משמשת כדי להשוות בין כמות קפסולה בין תרבויות, לבודד מוטנטים עם פנוטיפ קפסולה ספציפית, או כדי לזהות הרגולטורים כמוסה. המתוארים כאן הוא אופטימיזציה ריצה של וזמינותו.

הפרדת חיידקים על ידי כמות הקפסולה באמצעות הדרגה צפיפות מקוטע

תרבית חוץ גופית היא שיטת זיהוי ישירה לנוכחות חיידקים חיים. פרוטוקול זה מתאר שיטות לתרבית של מגוון סוגי Borrelia spirochetes, כולל אלה של Borrelia burgdorferi sensu lato complex, קדחת התקפית של מיני Borrelia ו- Borrelia miyamotoi.  מינים אלה הם חסונים וגדלים לאט, אך ניתן לתרבית אותם.

שיטות גידול של Spirochetes מ Borrelia burgdorferi Sensu Lato קומפלקס קדחת התקפית Borrelia

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את התפשטות נגיף הזיקה (ZIKV) בתאי כליות של קוף ירוק אפריקאי ורו ואת הכימות של ZIKV באמצעות שיטות זיהוי חיסוני קולורימטרי מבוססות תאים בפורמטים של 24 בארות ו-96 בארות (תפוקה גבוהה).

התפשטות וירוסים וכימות קולורימטרי מבוסס תאים

הקהילות מיקרוביאלית בטבע מעבדה - ראיון

וידאו זה מראה כיצד להשתמש חולץ לתכנות לעשות pipettes תיקון אלקטרודות חדה electrophysiology. הפרוצדורה זהה ניתן להשתמש כדי ליצור מגוון של כלי זכוכית, כולל הזרקה ומחטים.

ביצוע Patch ו-pipettes אלקטרודות שארפ עם פולר לתכנות

למד טכניקות מעבדה אספטיות להעברת נפחים בדיוק באמצעות טפטפות סרולוגיות ומיקרופיפטורים. שיטות אלו ממזערות זיהום ומבטיחות הצלחה ניסיונית במחקר מיקרוביולוגי.

טכניקות מעבדה אספטיים: העברות נפח עם טפטפות ו Micropipettors סרולוגיות

גלה סרטונים נוספים