Name: בידוד באף גזע תאים חוש הריח של מכרסמים או בני אדם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: למדו לבודד תאי גזע מאפיתל הריח האף ממכרסמים או בני אדם. שיטה זו מאפשרת זיהוי אנומליות מולקולריות במחלות מוח ותיקון נזקים עצביים בדגמי בעלי חיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה כלכלית על ידי ANR (סוכנות הידיעות הלאומית של de la משוכלל ונדיר), AFM (העמותה Francaise Myopathies contre les), פדר ב PACA ו IRME (Institut de la משוכלל ונדיר sur Moelle épinière et l&#39;Encéphale). אנחנו בהכרת תודה תודה מארי ופייר בלנשרד (ז&#39;אן רוש המכון) על העזרה היעילה שלה במהלך ההקלטה זמן לשגות.

1. אוסף של רירית חוש הריח בחולדות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין על ידי הכנת מנות three 35 מ"מ פטרי מלאות בינוני F12 DMEM / HAM תרבות במנדף תרבות נקייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל שיטה של ​​המתת חסד חייב לקבל אישור מראש על ידי טיפול בבעלי חיים של המוסד והוועדה להשתמש ובוצע על ידי טכנאי מוסמך. אחרי החולדה נכנסה הרדמה עמוקה עם צורות נתרן pentobarbital או אחר בזריקות הרדמה כגון קטמין / xylazine, לערוף ולהסיר את העור. הרדמה נשימתית יש להימנע. הלימות של הרדמה יוערכו על ידי צביטה הבוהן לפני עריפת ראש. הסר את הלסת התחתונה עם מספריים בעזרת rongeur, לחסל את שרירי הפנים משני הצדדים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מהחלק האחורי של השיניים החותכות, הסר עם rongeur העצם המכסה את חלל האף, בצד אחד בכל פעם. Turbinates הריח נכנס מראה כמו כתום / חום באיברים הממוקם בחלק האחורי של האף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להתעלמות turbinates עם מלקחיים. בעזרת מחט מד 26, לבודד את רירית ההרחה שוכב על מחצה על ידי חיתוך הרקמה לאורך שלושה קווים: קשת הצלחת בניצב, את הצלחת cribriform ואת התקרה של חלל האף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף ביופסיות משני הצדדים ולהעביר אותם מנה DMEM / HAM פטרי F12 מלא. הליך זה לא אמור לקחת יותר מ 10 דקות המתת חסד את התחלתה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כעת, על מנת להסיר את רירית, העברת ביופסיות פעמיים בינוני מלא בצלחות פטרי. </li></ol> 2. אוסף של רירית חוש הריח בבני אדם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך זה צריך להתבצע על ידי אף אוזן גרון (אא"ג) המנתח, בהתאם רלוונטי ועדה אתית מקומית (ים) ו חוץ כל צריך לחתום על טופס הסכמה מדעת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש 0 ° או 30 ° אנדוסקופ קשיח (4 מ"מ קוטר), לבדוק את שני החללים באף להעריך את נוכחות המשוערת של פוליפים או נגעים דלקתיים. בחר את חלל האף הטובה ביותר, תוך התחשבות חריגה של מחיצת האף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מטוש צמר גפן, להחיל הרדמה מקומית, כמו לידוקאין עם אפינפרין, במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים כברתי throughcut, לאסוף שני ביופסיה מילימטר מרובע או בשורש היבט המדיאלי של חלזוני באמצע או על מחצה באזור dorsomedial. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביופסיה של חוש הריח הוא הועבר לאחר מכן, באמצעות מחט סטרילית, לתוך צינור 2 מ"ל סטרילי מלא 1 מ"ל של DMEM / HAM F12. עצה הצינור הפוך לוודא כי הביופסיה הוא שקוע בתוך המדיום לתרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את הצינור במיכל בקירור ולהעביר אותה למעבדת מחקר. בשלב זה, ביופסיה יכולה לשמש כשלעצמה עבור מחקרים מולקולריים השוואתית מתמקדת במחלות מוח ספציפיים או מעובד להפקת בתאי גזע. </li></ol> 3. בידוד של גזע תאים רירית חוש הריח של האדם עכברוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את ביופסיות ב DMEM / HAM F12. דגירה ביופסיות בצלחת פטרי מלאות מ"ל 1 של dispase II פתרון (2.4 IU / ml), במשך שעה 1 ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ לנתח באור הפוך diffracted, אפיתל ההרחה יוסר lamina propria הבסיסית באמצעות מרית מיקרו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפיתל הריח הוא דק יותר נראה שקוף על רקע שחור לעומת lamina propria אשר פסים כתום / חום. במהלך רקע לבן, האפיתל נראה אפור lamina propria, חום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מטוהרים פעם אחת, להעביר את lamina propria לתוך צלחת פטרי מלאות DMEM / HAM F12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הרקמה של מכרסם, ואז לחתוך את lamina propria לחתיכות קטנות עם שתי 25 מחטים מד. ואז, להעביר את חתיכות צינור 15 מ"ל מלא 1 מ"ל של collagenase IA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך הצינור, בעזרת פיפטה פלסטיק סטרילית, לנתק את הרקמה. ואז, דגירה הצינור במשך 10 דקות על 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לסיים את הניתוק, בעדינות הסלע צינור ולהוסיף 9 מ"ל של Ca-Mg חופשית ללא PBS ו צנטריפוגות ב 200 גר 'במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend התא גלולה במדיום F12 DMEM / HAM תרבות בתוספת סרום 10% עגל, אנטיביוטיקה העובר על צלחת צלחות תרבות הפלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, אם הרקמה האנושית, אז הפרוסה lamina propria לתוך 3-4 חתיכות עם עובי הנע 200-500 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס כל רצועה 2 לתוך צלחת משלו בקוטר ס"מ תרבות לכסות את הרקמה עם סטרילי בקוטר 1.3 ס"מ תלושי זכוכית המכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז, להוסיף 500 μl של המדיום תרבות (DMEM / HAM F12 בתוספת סרום 10% עגל אנטיביוטיקה עוברי) כדי בצלחת כל תרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור סוג או רקמות, לחדש את המדיום תרבות כל 2 עד 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חמישה עד שבעה ימים אחרי, בתאי גזע יחלו לפלוש צלחת תרבות ואחרי שבועיים הם צריכים להיות ומחוברות. Confluency כאשר הוא הגיע, מעבר ולהעביר את התאים צלוחיות תרבות. </li></ol> 4. כדור גיבוש Differe העצביתntiation בתאי גזע של חוש הריח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי ליצור תא גזע התחומים, דגירה צלוחיות במשך שעתיים על 37 מעלות צלזיוס עם פולי-L-ליזין. (טקסט: 5 g/cm2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט התאים בצפיפות של 16,000 תאים לסנטימטר מרובע של צלוחיות טיפול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל יומיים, להאכיל את התאים עם 0.2ml לסנטימטר מרובע של המדיום שיושלם (DMEM / HAM F12 בתוספת אינסולין, transferrin, סלניום (X-ITS, 1%), EGF (50 ng / ml) ו FGF2 (50 ng / מ"ל)). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יומיים עד חמישה ימים מאוחר יותר, לאסוף כדורים תא צף מחדש או צלחת או לנתק אותם לפני השתלת במודלים של בעלי חיים טיפול בתא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להבדיל מתאי גזע הריח לתוך נוירון כמו תאים, לטפח אותם במשך 21 ימים בתווך Neurobasal המכיל B-27, פניצילין, סטרפטומיצין גלוטמין ו - גלוטמאט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז לבצע שינויים בינוני כל 3 ימים. Neuron דמויי תאים אמור להופיע לאחר שבועיים עד שלושה שבועות. </li></ol> 5. נציג תוצאות: באף האנושי explant-התבגרות בתאי גזע (איור 2 א) מתחלקים במהירות confluency ניתן להגיע בתוך שבוע עד שבועיים. אחת התכונות העיקריות של stemness, הביטוי nestin, הוערך (2B איור). כאשר גדל על פולי-L-ליזין בינוני עם סרום ללא תרבות בתוספת EGF (50 ng / ml) ו FGF2 (50 ng / ml), בתאי גזע הריח להצמיח התחומים (דמות 2C). כאשר גדל בינוני סרום המכיל התרבות החדש התחומים מצופה להצמיח GFAP-להביע תאים (~ 50%), טובולין-להביע תאים (~ 10-15%) ו-O4 להביע תאים (~ 2-5%), 9 (איורים 2D-F). עם זאת, גורלו של כדור הנגזרות תאים יכול להיות שונה. לדוגמה, כאשר גדל בינוני תרבות Neurobasal בתוספת B27 ו גלוטמט, רוב התאים לאף גזע הריח לתוך תא העצב, כמו תאים להביע β-III טובולין (איור 2G) ו MAP2 (איור 2H). <img src="/files/ftp_upload/2762/2762fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. תכנית כוללת של הניסוי. חוש הריח ביופסיות רירית הם נכרת מן החולדה או חלל האף האנושי. Explants יכולה לשמש כשלעצמה עבור מחקרים מולקולריים השוואתי במטרה לזהות סמנים ביולוגיים במחלות מוח. לבידוד בתאי גזע חוש הריח, אינטראקציות בין lamina propria ואת נוירו אפיתל הם שיבשו עם השנייה dispase האנזים, ואחרי 45 דקות, אפיתל יוסר עם מרית המיקרו. חוש הריח מכרסם בתאי גזע שנבחרו נוספת על ידי dissociating lamina propria עם collagenase IA. עבור רקמה אנושית, פיסות lamina propria חוש הריח הם תרבותי תחת זכוכית coverslip עד בתאי גזע התבגרות לפלוש כולו טוב. לאחר התפשטות, באמצעות המדיום המתאים תרבות, בתאי גזע חוש הריח יכול ליצור כדורים או להתמיין נוירון דמויי תאים. חוש הריח בתאי גזע שניתן להשתמש בהם כדי i) המוח לתקן מחלות או טראומה או ii) לזהות סמנים מולקולריים של מחלות מערכת העצבים המרכזית. איורים נעשים בעזרת אמנות רפואי Servier. <img src="/files/ftp_upload/2762/2762fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. התרבות והתמיינות של תאים אנושיים האף גזע חוש הריח. בתאי גזע האדם גדל מתוך lamina propria explant (א) מתחלקים במהירות, כאשר מעובדות בינוני סרום המכיל. בתאי גזע לבטא את stemness סמן nestin (B). כאשר מצופה פלסטיק על פולי-L-ליזין מצופה וטיפח במדיום סרום ללא תרבות בתוספת EGF ו FGF2, בתאי גזע הריח ליצור כדורים (C). כדור הנגזרות תאים, כאשר מצופה במדיום סרום המכיל תרבות, להצמיח GFAP-להביע תאים (~ 50%), טובולין-להביע תאים (~ 10-15%) ו-O4 להביע תאים (~ 2-5%) 9 (DF). כאשר גדל בינוני תרבות Neurobasal בתוספת B27 ו גלוטמט, הם להתמיין לתאי עצב, כמו הבעת β-III טובולין (G) MAP2 (H).

<ol><li>Feron, F., Perry, C., McGrath, J. J., Mackay-Sim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+techniques+for+biopsy+and+culture+of+human+olfactory+epithelial+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">New techniques for biopsy and culture of human olfactory epithelial neurons.</a> Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 124, 861-866 (1998).</li>
<li>Ronnett, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+biopsies+demonstrate+a+defect+in+neuronal+development+in+Rett%27s+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Olfactory biopsies demonstrate a defect in neuronal development in Rett's syndrome.</a> Ann Neurol. 54, 206-218 (2003).</li>
<li>Feron, F., Perry, C., Hirning, M. H., McGrath, J., Mackay-Sim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+adhesion%2C+proliferation+and+death+in+neural+cultures+from+adults+with+schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophr+Res%22%5BJournal%5D)">Altered adhesion, proliferation and death in neural cultures from adults with schizophrenia.</a> Schizophr Res. 40, 211-218 (1999).</li>
<li>Matigian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disease-specific%2C+neurosphere-derived+cells+as+models+for+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Disease-specific, neurosphere-derived cells as models for brain disorders.</a> Dis Model Mech. 3, 11-12 (2010).</li>
<li>Arnold, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+epithelium+amyloid-beta+and+paired+helical+filament-tau+pathology+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Olfactory epithelium amyloid-beta and paired helical filament-tau pathology in Alzheimer disease.</a> Ann Neurol. 67, 462-469 (2010).</li>
<li>Boone, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+stem+cells%2C+a+new+cellular+model+for+studying+molecular+mechanisms+underlying+familial+dysautonomia%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Olfactory stem cells, a new cellular model for studying molecular mechanisms underlying familial dysautonomia.</a> PLoS One. , (2010).</li>
<li>McCurdy, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+alterations+in+biopsied+olfactory+neuroepithelium+in+schizophrenia+and+bipolar+I+disorder+using+cell+culture+and+gene+expression+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophr+Res%22%5BJournal%5D)">Cell cycle alterations in biopsied olfactory neuroepithelium in schizophrenia and bipolar I disorder using cell culture and gene expression analyses.</a> Schizophr Res. 82, 163-173 (2006).</li>
<li>Roisen, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+olfactory+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Adult human olfactory stem cells.</a> Brain Res. 890, 11-22 (2001).</li>
<li>Murrell, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+stem+cells+from+adult+olfactory+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Multipotent stem cells from adult olfactory mucosa.</a> Dev Dyn. 233, 496-515 (2005).</li>
<li>Tome, M., Lindsay, S. L., Riddell, J. S., Barnett, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+nonepithelial+multipotent+cells+in+the+embryonic+olfactory+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Identification of nonepithelial multipotent cells in the embryonic olfactory mucosa.</a> Stem Cells. 27, 2196-2208 (2009).</li>
<li>Delorme, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+nose+harbors+a+niche+of+olfactory+ectomesenchymal+stem+cells+displaying+neurogenic+and+osteogenic+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">The human nose harbors a niche of olfactory ectomesenchymal stem cells displaying neurogenic and osteogenic properties.</a> Stem Cells Dev. 19, 853-866 (2010).</li>
<li>Xiao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adult+olfactory+neural+progenitors+rescue+axotomized+rodent+rubrospinal+neurons+and+promote+functional+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Human adult olfactory neural progenitors rescue axotomized rodent rubrospinal neurons and promote functional recovery.</a> Exp Neurol. 194, 12-30 (2005).</li>
<li>Xiao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adult+olfactory+neural+progenitors+promote+axotomized+rubrospinal+tract+axonal+reinnervation+and+locomotor+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Human adult olfactory neural progenitors promote axotomized rubrospinal tract axonal reinnervation and locomotor recovery.</a> Neurobiol Dis. 26, 363-374 (2007).</li>
<li>Pandit, S. R., Sullivan, J. M., Egger, V., Borecki, A. A., Oleskevich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Effects+of+Adult+Human+Olfactory+Stem+Cells+on+Early-Onset+Sensorineural+Hearing+Loss%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Functional Effects of Adult Human Olfactory Stem Cells on Early-Onset Sensorineural Hearing Loss.</a> Stem Cells. , (2011).</li>
<li>Murrell, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+mucosa+is+a+potential+source+for+autologous+stem+cell+therapy+for+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Olfactory mucosa is a potential source for autologous stem cell therapy for Parkinson's disease.</a> Stem Cells. 26, 2183-2192 (2008).</li>
<li>Nivet, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engraftment+of+human+nasal+olfactory+stem+cells+restores+neuroplasticity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Engraftment of human nasal olfactory stem cells restores neuroplasticity in mice.</a> The Journal of Clinical Investigation. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Bianco, J. I., Perry, C., Harkin, D. G., Mackay-Sim, A., Feron, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophin+3+promotes+purification+and+proliferation+of+olfactory+ensheathing+cells+from+human+nose%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Neurotrophin 3 promotes purification and proliferation of olfactory ensheathing cells from human nose.</a> Glia. 45, 111-123 (2004).</li>
<li>Mackay-Sim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+olfactory+ensheathing+cell+transplantation+in+human+paraplegia%3A+a+3-year+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Autologous olfactory ensheathing cell transplantation in human paraplegia: a 3-year clinical trial.</a> Brain. 131, 2376-2386 (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הטכניקות שהוצגו כאן להפוך את המכרסמים רירית ההרחה האנושית מודל שימושי עבור מחקר קליני על הגורמים מחלות התפתחותיות ו ניווניות, כמו גם כלי תיקון מוח פתולוגי או טראומה. הפרוטוקול היא פשוטה יחסית, יכול להתבצע בקלות על ידי הביולוג תא מנוסים. שיעור ההצלחה של שיטות ביופסיה ותרבות גבוהה. צעדים קריטיים <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור אוסף של רירית ההרחה מכרסם, מומלץ שלא יעלה על מגבלת זמן של 10 דקות בין המתת חסד לבין כריתה הסופי של רקמת ההרחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הניתוק של lamina propria הריח מכרסם מושגת בדרך כלל לאחר 10 דקות. הדגירה ב collagenase IA. אם לא, אנו ממליצים לאסוף יום לאחר supernatant שבו פיסות undissociated של לצוף lamina propria, צנטריפוגה זה ב 200 גר &#39;ו - מכנית לנתק את lamina צף בעזרת פיפטה פסטר לפני replating התאים באר חדשה. גם הראשון המכיל את התאים מחוברים כבר מתמלא בינוני תרבות טריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור lamina propria האדם, היא קומפקטית יותר רקמת מכרסם, אנחנו לא ממליצים דיסוציאציה האנזימטית. רקמה היא פרוסים בכל explant מוכנס בין החלק התחתון של צלחת פלסטיק זכוכית coverslip. תרבויות מוצלח כוללים explants אשר עובי בטווח 200-500 מיקרומטר. </li></ul> שינויים אפשריים <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרוטוקול הנוכחי יכול להיות שונה מעט על מנת לייצר נוירונים הריח במבחנה. לשם כך, נוירו אפיתל אינו מוסר את רירית ההרחה כולו פרוס עם המסוק McIlwain (200 מיקרומטר עובי). Explant כל מצופה בצלחת, מיובשים חלקית במשך שעה אחת ו rehydrated אז עם המדיום FCS המכילים תרבות. במהלך ציפוי בימים הראשונים שלאחר, תאים אפיתל mesenchymal לצמוח מתוך explant. ואז, אבות נוירון יעברו על החלק העליון של שכבה זו של תאים להתמיין לנוירונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיהור בתאי גזע חוש הריח יכולה להיות מושגת באמצעות cytometry הזרימה. סמנים ספציפיים השטח ניתן לאחזר מהרשימה שפורסם בעיתון אפיון 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על הניסויים השתלה, ניתן להשתמש זן של חולדות אשר הריח בתאי גזע ה-GFP חיובי. זה זן עכברים (ספראג Dawley, eGFP מונע על ידי האמרגן PGK) זמין בכתובת ITERT (נאנט, צרפת). עבור החדרת הגן GFP בבני אדם בתאי גזע חוש הריח, אנו משתמשים בשיטה המבוססת על זיהום lentivirus. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאמר זה מתמקד חיצוני mesenchymal גזע לתאי חוש הריח. עם זאת, סוג תא אחר של עניין, התאים ensheathing חוש הריח, יכול להיות מטוהרים מרקמות זהה. אנו תיאר שיטה אוסף שלהם טיהור 1,17 והיינו האדם תאים ensheathing האף לניסוי שלב I / IIa קליניים בחולים משותק 18. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כחבר של superfamily גזע mesenchymal התא, OE-MSCs יכולים, בתנאים המתאימים תרבות, להתמיין adipocytes, osteocytes ו myocytes 11. </li></ul> יישומים עתידיים <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לנו כבר בשימוש ביופסיות חוש הריח האנושי ללמוד אנומליות תאית ומולקולרית בחולים עם אוטיזם, הפרעה דו קוטבית, לדיסאוטונומיה משפחתית, מחלת פרקינסון, אלצהיימר וסכיזופרניה 2-7. תיאורטית, כל המחלות במוח ניתן ללמוד באמצעות ביופסיות האף או היקפית בתאי גזע חוש הריח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכרסמים אדם בתאי גזע האף הריח כבר מורכבים במודלים של בעלי חיים של אמנזיה, מחלת פרקינסון, נזק שבלול וטראומה חוט השדרה 12-16. זה מתקבל על הדעת להשתיל את התאים האלה לתוך מודלים של בעלי חיים של מחלת אלצהיימר, איסכמיה, טרשת נפוצה. </li></ul>

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td colspan="3"> אוסף של רירית חוש הריח בחולדות </td></tr><tr><td> DMEM / HAM F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 31331-028 </td></tr><tr><td> Pentobarbital נתרן </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rongeur </td><td> FST </td><td></td></tr><tr><td> 26 מחט מד </td><td> Terumo </td><td> NN-2613R </td></tr><tr><td> מצבטים </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="3"> אוסף של רירית ההרחה בבני אדם </td></tr><tr><td> אנדוסקופ קשיח </td><td> קרל Storz או ריצ&#39;רד וולף לרפואה </td><td></td></tr><tr><td> לידוקאין </td><td></td><td></td></tr><tr><td> אפינפרין </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Throughcut כברתי מלקחיים </td><td> קרל Storz או ריצ&#39;רד וולף לרפואה </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"> בידוד בתאי גזע חוש הריח </td></tr><tr><td> Dispase II </td><td> רוש </td><td> 10 295 825 001 </td></tr><tr><td> הביתור מיקרוסקופ </td><td></td><td></td></tr><tr><td> מיקרו מרית </td><td> FST </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase IA </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> C9891 </td></tr><tr><td> Ca-free/Mg-free PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14190-250 </td></tr><tr><td> עגל עוברית בסרום </td><td> Invitrogen </td><td> 10270098 </td></tr><tr><td> זכוכית coverslip </td><td> Knittel גלזר </td><td> 001/35 </td></tr><tr><td colspan="3"> היווצרות כדור והבחנה עצבית </td></tr><tr><td> פולי-L-ליזין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> P-1274 </td></tr><tr><td> אינסולין transferrin סלניום (ITS) </td><td> Invitrogen </td><td> 51500056 </td></tr><tr><td> EGF </td><td> R &amp; D מערכות </td><td> 236-EG </td></tr><tr><td> FGF2 </td><td> R &amp; D מערכות </td><td> 233-FB </td></tr><tr><td> Neurobasal בינוני </td><td> Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B-27 סרום ללא תוספת </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> Invitrogen </td><td> 15140122 </td></tr><tr><td> גלוטמין </td><td> Invitrogen </td><td> 25030024 </td></tr><tr><td> גלוטמט </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד באף גזע תאים חוש הריח של מכרסמים או בני אדם

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

רירית ההרחה, הממוקמת בחלל האף, הוא אחראי על זיהוי ריחות. זהו גם רקמת העצבים רק כי הוא חשוף לסביבה החיצונית ונגיש בקלות כל אדם חי. כתוצאה מכך, רקמה זו היא ייחודית לכל אדם במטרה לזהות אנומליות מולקולריים במוח פתולוגי או לבודד בתאי גזע בוגרים לטיפול בתא. ליקויים מולקולרית במחלות מוח נלמדים לעתים קרובות באמצעות דגימות רקמה שנאספו העצבים שלאחר המוות. עם זאת, חומר זה יש מגבלות רבות. לעומת זאת, רירית ההרחה הוא נגיש וניתן ביופסיה בבטחה ללא אובדן חוש הריח 1. לפיכך, רירית ההרחה מספקת &quot;חלון פתוח&quot; על האדם המבוגר דרכו ניתן ללמוד התפתחותית (כגון סכיזופרניה, אוטיזם) 2-4 או ניווניות (כגון פרקינסון, אלצהיימר) מחלות 4,5. רירית חוש הריח יכול לשמש גם מחקרים מולקולריים השוואתי 4,6 או בניסויים במבחנה על neurogenesis 3,7. אפיתל הריח הוא גם רקמת העצבים שמייצר נוירונים חדשים כל יום כדי להחליף את אלה שנפגעו זיהום, חיידקי של זיהומים נגיפיים. Neurogenesis זה קבע שנגרמו אבות, אלא גם בתאי גזע המתגוררים בתוך שני תאים של רירית, כלומר neuroepithelium ו lamina propria 8-10 הבסיסית. אנחנו לאחרונה פיתחה שיטה לטיהור בתאי גזע בוגרים ממוקם lamina propria ו, לאחר הוכיחו כי הם קשורים באופן הדוק מח עצם mesenchymal בתאי גזע (BM-MSC), קראנו להם חוש הריח חיצוני mesenchymal בתאי גזע (OE- MSC) 11. מעניין לציין, כי בהשוואה BM-MSCs, OE-MSCs להציג קצב התפשטות גבוה, clonogenicity מוגבה נטייה להתמיין תאים עצביים. ניצלנו את המאפיינים הללו לבצע מחקרים מוקדש לחשוף גנים מועמדים חדשים סכיזופרניה 4 מחלת פרקינסון. אנו ואחרים הראו גם כי OE-MSCs מבטיחים המועמדים טיפול בתא, לאחר טראומה חוט השדרה 12,13, 14 נזק שבלול או במודלים של בעלי חיים של מחלת פרקינסון 15 או 16 אמנזיה. במחקר זה, אנו מציגים שיטות ביופסיה של רירית ההרחה אצל חולדות ובני אדם. לאחר איסוף, propria lamina מופרדת enzymatically מן האפיתל ותאי גזע הם מטוהרים באמצעות אנזימטית או שיטה שאינה האנזימטית. מטוהר בתאי גזע הריח אז יכול להיות גדל גם במספרים גדולים, ובנתה בחנקן נוזלי או המושרה ליצור כדורים או מובחן לתוך תאים עצביים. תאים אלה גזע יכול לשמש גם עבור omics (גנומי, transcriptomic, epigenomic, proteomic) מחקרים השוואתיים.

אנו מתארים כאן שיטה לביופסיה של רירית חוש הריח של העכברים וחללים האף האנושי. ביופסיות אלו יכולים לשמש גם לזיהוי חריגות מולקולרי במחלות מוח או בידוד multipotent גזע בוגרים לתאי כי יכול להיות מנוצל עבור השתלת תאים בבעלי חיים טראומה מוחית / מחלה.

הרירית הריחית, הממוקמת בחלל האף, אחראית על זיהוי ריחות. היא גם רקמת העצבים היחידה החשופה לסביבה החיצונית...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לבודד תאי גזע אולפקטוריים (ריח) מהאף של חולדות או בני אדם, במטרה לזהות anomalias מולקולריות או לתקן מוח פתולוגי או פגוע מטראומה. דבר זה מושג תחילה על ידי איסוף כירורגי של ביופסיות מהרירית האולפקטורית מחלל האף. לאחר מכן, מסירים את האפיתל האולפקטורי ואת תאי הגזע האפיתליאליים שלו כדי להתמקד בתאי גזע אקטומזנכימליים ב-Lamin propria שמתחתם, ולאחר מכן מבודדים תאים אלו על ידי דיסוציאציה של רקמת מכרסמים, או איסוף תאים שצמחו מחוץ לשתלים אנושיים שגודלו תחת לוחות כיסוי מזכוכית.השלב הסופי של הפרוצדורה הוא גידול ספירות של תאי גזע תוך השראה לדיפרנציאציה לתאים דמויי נוירונים. בסופו של דבר, ביצוע explan של כל הרירית האולפקטורית, תאי גזע אינדיבידואליים. ניתן להשתמש בספירות צפות או בתאים דמויי נוירונים לצורך זיהוי סמנים מולקולריים במחלות מוח או לתיקון נזקים למערכת העצבים.אנו מתארים את שיטתה לבידוד תאי גזע אפים של בני אדם ומכרסמים מהרירית האולפקטורית. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות הוא שתאי הגזע שייכים לרקמה עצבית, הם נגישים בקלות בכל פרט חי, וניתן להשתמש בהם לאבחון או לתיקון של מוח פתולוגי. כמנתח אף-אוזן-גרון, ביצעתי מאות ביופסיות של האף עבור מחקרים קליניים.ההליך בטוח וניתן לביצוע. והאלחוש המקומי הכללי. אני מדען זוטר עם מומחיות בתרבית של תאי גזע אנושיים או של מוטות, אפים או פקטורים.אלו מראים קצב הכנה גבוה של תאי גזע ונטייה להתמיין לסוגי תאי עצב. הוכח כי הם יעילים במודלים של בעלי חיים לאמנזיה ולמחלות ניווניות של מערכת העצבים. לפני איסוף הרירית, הכינו בתוך מנדף תרבית סטרילי 3 צלחות פטרי בקוטר 35 מילימטר עם מצע תרבית DMEM/F12.כעת, לאחר אימות באמצעות צביטה בבהוות שהחולדה נכנסה להרדמה עמוקה עם sodium pentobarbital, בצעו המתה באמצעות עריפת ראש. בדלו את הראש והסירו את העור. הסירו את הלסת התחתונה בעזרת מספריים, ובסיוע של פינצטה, הסירו את שרירי הפנים משני הצדדים, החל מאזור החלק האחורי של השיניים החותכות.באמצעות ה-Ron Jur, הסר את העצם המכסה את חלל האף, צד אחד בכל פעם. הטורבינות האולפקטוריות (conchae olfactoriae) יבואו למבט כאיברים בצבע כתום-חום הממוקמים בחלק האחורי של האף; הסר בעדינות את הטורבינות באמצעות פינצטה.באמצעות מחט בכילייב 26, בודדו את הרירית האולפקטורית השוכנת על המחיצה על ידי חיתוך הרקמה לאורך שלושה קווים: קשת הפלטה הניצבת (perpendicular plate), פלטת ה-CRI ותקרת חלל האף. אספו ביופסיות משני הצדדים והעבירו אותן לצלחת פטרי מלאה ב-A-D-M-E-M ham F 12. הליך זה לא אמור להימשך יותר מ-10 דקות מרגע תחילת ההמתה.כעת, כדי להסיר את הריר, העבירו את הביופסיות פעמיים לצלוחיות פטרי מלאות בתווך, בהתאם לוועדות האתיקה המקומיות הרלוונטיות. מנתח אף, אוזן וגרון צריך לבצע הליך זה, וכל מטופל חוץ צריך לחתום על טופס הסכמה מדעת, תוך שימוש באנדוסקופ קשיח של 0 מעלות או 30 מעלות. בחנו את שתי חללי האף והעריכו את הנוכחות המשוערת של פוליפים או כל נגע דלקתי.יש לבחור את חלל האף המתאים ביותר בהתחשב בסטייה של המחיצה. בעזרת מקלוני צמר, יש למרוח חומר אלחוש מקומי כגון לידוקאין עם אפינפרין למשך 10 דקות עם חיתוך יסודי. באמצעות מלקחי אתמואיד יש לדגום ביופסיה של שני מילימטרים רבועים, באזור השורש של ההיבט המדיאלי של הקונכה האמצעית או על המחיצה באזור המדיאלי-דורסלי.כאן אנו מראים את הביופסיה מאזור השורש. את הביופסיית הריח מעבירים לאחר מכן, באמצעות מחט סטרילית, לשפופרת סטרילית של שני מיליליטר המלאה ב-1 mL של DMEM hem F 12. הפכו את השפופרת כדי לוודא שהביופסיה טבולה בתווך התרבית.הכנס את המבחנה למכלול קירור והעבר אותה למעבדה למחקר. בשלב זה, ניתן להשתמש בביופסיה כשלעצמה למחקרים מולקולריים השוואתיים המתמקדים במחלות מוח ספציפיות, או לעבד אותה לצורך ייצור תאי גזע. שטוף את הביופסיות האנושיות או של חולדות ב-DMEM ham F 12 והדגר את הביופסיות בצלחת פטרי המכילה מיליליטר אחד של dis paste.השרויה בשני תמיסות למשך שעה אחת ב-37 degrees celsius. לאחר מכן, מסירים את אפיתל הריח של בן האדם או של חולדה מה-Lamin propria שמתחתיו באמצעות שפכטל מיקרוסקופי תחת מיקרוסקופ דיסקציה עם תאורה הפוכה מפוזרת. אפיתל הריח הוא שקוף על רקע שחור בהשוואה ל-lamin propria, שמופיע כפסים בצבע כתום-חום על רקע לבן.האפיתל נראה אפור והלמינה פרופריה (Lamin propria) נראית חומה לאחר הטהרה; העבר את הלמינה פרופריה לצנחת פטרי מלאה ב-DMEM hem F 12. אם הרקמה היא ממכרסם, חתוך את הלמינה פרופריה לחתיכות קטנות בעזרת שתי מחטים בכיול 25 gauge. לאחר מכן, העבר את החתיכות לשפופרת של 15 milliliter מלאה ב-1 milliliter של collagenase one A, והשתמש בפ pipette פלסטית סטרילית כדי לפרק את הרקמה בתוך השפופרת.לאחר מכן, דגרו את המבחנה למשך 10 דקות ב-37 degrees Celsius. כדי להפסיק את הדיסוציאציה, נער את המבחנה בעדינות, הוסיפו מיליליטרים של PBS נטול סידן ומגנזיום וסובבו בצנטריפוגה ב-200 Gs למשך חמש דקות. השביו את משקע התאים בתוך תווך גידול והעבירו אותם לצלחות גידול פלסטיות.כעת, אם הרקמה היא אנושית, חתכו את הלימון באופן מתאים לשלוש עד ארבעה חלקים. הכניסו כל רצועה לבאר נפרדת בקוטר של 2 cm בתוך פלטה של 4 בארות, וכסו את הרקמה עם כיסויי זכוכית סטריליים בקוטר של 1.3 cm.לאחר מכן, הוסיפו 500 µL של מצע גידול לכל צלחת תרבית עבור כל אחד מסוגי הרקמות. יש לחדש את מצע הגידול מדי יומיים עד שלושה ימים. לאחר חמישה עד שבעה ימי גידול, תרכיבי תאי הגזע יתחילו לפלוש לצלחת התרבית.לאחר שבועיים, התאים אמורים להגיע לקונופלואנציה. כאשר תושג קונופלואנציה, יש לבצע פסאז' ולהעביר את התאים לבקבוקי תרבית כדי להפיק ספירות של תאי גזע.זריעה חוזרת של התאים בצפיפות של 16,000 תאים לסמ"ר לתוך בקבוקים שעברו טיפול מקדים מדי יומיים. הזנה של התאים ב-0.2 מיליליטר לסמ"ר של מצע מועשר. כעבור יומיים עד חמישה ימים, אספו את ספרוני התאים הצפים ובצעו להם זריעה חוזרת או פירוק לפני ההשתלה.מודל חיה לטיפול תאי להבחנה של תאי גזע ריחוניים לתאים דמויי נוירונים. יש לגדל את התאים למשך 21 ימים במצע neuro basal המכיל B 27, פניצילין, סטריפטומייצין, גלוטמין וגלוטמט, ולאחר מכן להחליף את המצע מדי שלושה ימים. תאים דמויי נוירונים אמורים להופיע לאחר שבועיים עד שלושה שבועות, חמישה עד שבעה ימים לאחר הזריעה.תאי גזע ריח אנושיים מהנחיר צמחו מתוך הרקמה המושתלת והתרבו במהירות. ניתן היה להגיע לfluence מלא תוך שבוע או שבועיים. מאפיין מפתח של תאי גזע, קינון וביטוי, הוערך כאשר הם גודלו על פוליליזין עם מצע תרבית נטול סרום המועשר ב-EGF ו-FGF two; תאי גזע הריח הולידו ספירות כאשר הספירות נזרעו בתרבית המכילה סרום.במדיום, הם הולידו אוכלוסיות תאים המכילות כ-50% תאים המבטאים GFAP, עד 15% תאים המבטאים tubulin, ועד 5% תאים המבטאים oh four. כאשר תאים שהופקו מהספירות גודלו במדיום תרבית neuro basal מועשר, רוב האוכלוסייה הפכה לתאים דמויי נוירונים המבטאים beta three tubulin. אותם תאים דמויי נוירונים ביטאו גם map two.כך ניתן לשנות את גורלן של תאי הגזע במהלך סמסטר אחד. טכניקה זו יכולה להפיק בקלות מיליוני תאי גזע בפחות מארבעה שבועות, ובכך לאפשר לקלינאים לבצע השתלות תאים אוטולוגיות בעתיד. ביופסיות של רירית האף יעילות מאוד לזיהוי סמנים ביולוגיים ומחלות מוח.לאחרונה הצלחנו למצוא גנים מועמדים חדשים לאוטיזם. כבר הקמנו בנק של תאי גזע ריחוניים מאנשים עם אוטיזם ומקבוצת ביקורת, וניתן להרחיב אותו להפרעות אחרות של המוח האנושי.

isolating-nasal-olfactory-stem-cells-from-rodents-or-humans

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פרוטוקול אופטימיזציה עבור בידוד של בתאי גזע מבלוטת הרוק עכבר מתואר. שיטה מעסיקה עיכול אנזימטי מכני, והיתרי הבידוד של salispheres המכילה תאים בעלי מאפיינים של בתאי גזע.

בידוד של בלוטת הרוק עכבר תאים גזע

סרטון זה מדגים פרוטוקול מפורט לבידוד דפנות החדר הצידי ממוחו של עכבר בוגר וביצוע דיסוציאציה אנזימטית של רקמות להשגת תאים בודדים. תאים אלה נתונים לאחר מכן לתנאי תרבית ספציפיים המשפרים באופן סלקטיבי את התפשטות תאי גזע עצביים ומקדמים את התמיינותם לתרביות משותפות של אוליגודנדרוציטים ואסטרוציטים.

השגת תרבית אוליגודנדרוציטים ואסטרוציטים מעורבת מתאי גזע עצביים של עכברים בוגרים

תאי ensheathing חוש ריח (OECs) הם תאי רכס עצביים המאפשרים צמיחה של תאי עצב ההרחה הראשוניים. נכס ספציפי זה יכול לשמש להשתלת תאים. אנו מציגים כאן מודל של השתלה סלולרית המבוסס על השימוש בOECs במודל פציעת עצב בגרון.

השתלה של תאי ensheathing חוש ריח להערכת החלמה תפקודית לאחר פגיעה עצבית היקפית

תאי גזע עצביים שנקטפו מהמוח הבוגר מתרבים מנוצלים ביישומים החל המחקר הבסיסי של התפתחות מערכת עצבים לחקור יישומים קליניים פוטנציאליים ברפואת רגנרטיבית. זה הופך את השליטה קפדנית בתנאי הבידוד וculturing משמשים לגידול תאים אלה קריטיים להישמע תוצאות ניסוי.

גידול בתאי גזע עצבי מאזורים קונבנציונליים ולא קונבנציונליים של המוח מכרסם מבוגרים

חוט השדרה של יונקים בוגרים מכיל תאי גזע/אב עצביים (NSPCs) שניתן לבודד ולהרחיב בתרבית. פרוטוקול זה מתאר את הקציר, הבידוד, התרבית והמעבר של NSPCs שנוצרו מהאזור הפרי-חדרי של חוט השדרה הבוגר מהחולדה ומתורמי השתלת איברים אנושיים.

בידוד של תאי גזע / עצביים מהאזור סביב חדרי המוח של העכברוש למבוגרים וחוט השדרה אנושי

כאן, אנחנו מציגים בטכניקה המיקרוכירורגית הרומן על בידודו של תאי גזע עצביים מ E13 העכבר עובר ganglionic קדושתו.

בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים עובריים בעכבר

תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 (ILC2s), המעורבים בדלקת מסוג 2, משתתפים בעיקר בתגובה לזיהום הלמינת'ס, מחלות אלרגיות, הומאוסטזיס מטבולי ותיקון רקמות. במחקר זה מודגם הליך לבידוד ILC2s מרירית האף וזיהוי הביטוי של CD226.

בידוד תאי לימפה מולדים מקבוצה 2 מרירית האף של העכבר כדי לזהות את הביטוי של CD226

שיטה לבידוד תאי גזע עצביים ותאי אב אוליגודנדרוציטים ממוחות של חולדות חיות מוצגת כאן בפירוט ניסיוני. הוא מאפשר אוספים מרובים של תאים אלה מאותם בעלי חיים מבלי לסכן את רווחתם.

שיטת "חליבת המוח" לבידוד תאי גזע עצביים ותאי אב אוליגודנדרוציטים מחולדות חיות

במאמר זה אנו מתארים מערכת נוקלאופקציה שנועדה לשפר את יעילות העברת הגנים בתאי גזע עצביים מורחבים (NSCs) שבודדו מהאזור התת-חדרי של המורין הבוגר. הממצאים מראים כי שיטה זו משפרת באופן משמעותי את ההפרעה הגנטית בתאי גזע גזעיים, עולה על היעילות של פרוטוקולי טרנספקציה מסורתיים ומשפרת את שיעור הישרדות התאים.

בידוד, התרחבות ונוקלאופקציה של תאי גזע עצביים מאזור תת-חדרי מורין בוגרים

מאמר זה מספק פרוטוקול יעיל לדיסקציה ודיסוציאציה של אפיתל הריח של עכברים לצורך ריצוף RNA חד-גרעיני.

דיסקציה ודיסוציאציה מהירה של אפיתל הריח של העכבר למתלים חד-גרעיניים

למדו לבודד תאי גזע מאפיתל הריח האף ממכרסמים או בני אדם. שיטה זו מאפשרת זיהוי אנומליות מולקולריות במחלות מוח ותיקון נזקים עצביים בדגמי בעלי חיים.

בידוד באף גזע תאים חוש הריח של מכרסמים או בני אדם

גלה סרטונים נוספים