Name: הכנת דגם לערער של Epileptogenesis פוסט במכרסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-15T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: למדו להכין דגם undercut של אפילפטוגנזה פוסט-טראומטית בעכברושים באמצעות מכשיר כירורגי מותאם אישית. שיטה זו מאפשרת יצירת פציעות מדויקות בעורף להבנת מנגנוני האפילפסיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH / NINDS מענק 4R00 NS 057940, ולהעניק SCBI 200-12 מ חוט השדרה פגיעה מוחית מחקר קרן ממדינת אינדיאנה מחלקת הבריאות.

1. הפיכת מכשיר פשוט לניתוח לערער <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המכשיר לערער יצרנו מורכב משלושה חלקים (איור 1): (1) צלחת תמיכה עשוי פלדה אל חלד או פלסטיק המאפשר התקשרות של צינור המנחה מחט, והוא יושב מול החלון גולגולתי במהלך הניתוח, (2) צינור המנחה שמחזיק מחט במצב והיתרים סיבוב מחט; ו (3) מחט זה כפוף 90 מעלות בשעה 3 מ"מ ~ מקצה, והוא מטלטלין על ידי סיבוב הכניסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים חתיכה של 1-1.5 מ"מ עובי, 7 ~ 10 x 30 מ"מ פלדה מלבני נירוסטה או פלסטיק שקוף (1) כדי להפוך את צלחת תמיכה. הכן 1.5 אינץ 22 מד (BD החברה, # 305156) ו 1.5 אינטש 25 מד (BD החברה, # 305127) מחט המזרק. כדי להפוך את צינור המנחה, לחתוך את הקצה פלסטיק קצה מחט התחתון של מחט 22-לאמוד את המזרק כך האורך הכולל שלה הוא כ - 31-32 מ"מ (2). בחול סוף מתכת כדי לעשות את זה שטוח וחלק. אורכו הסופי של צינור זה המנחה צריך להיות בערך 5-6 מ"מ קצר יותר מאשר מחט 25-לאמוד את המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בדבק cyanoacrylate לתקן את הצינור המנחה לצלחת תמיכה, ולוודא כי הוא המחט בניצב קצה המתכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את מחט מד 25-מזרק לתוך הצינור המנחה, לכופף את המחט 90 מעלות 2.5-3 מ"מ מהקצה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את טווח נע האנכית של המחט על ידי הדבקת צינורית פלסטיק קטנה אל הקצה את המחט (איור 1, לעצור את המחט). הטווח נע הסופי של המחט קובע כמה עמוק את המחט יכול להיות מוכנס לתוך קליפת המוח, ויש 1.6-1.8 מ"מ עבור p21 חולדות 1.3-1.5 מ"מ עבור p21 בעכברים. אורך זה צריך להיות מותאם המינים בגילאים שונים של בעלי חיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף חוטי נחושת קטנים או חתיכה קטנה של סרט אל הקצה העליון של המחט באותו כיוון כמו קצה כפופות (תמונה 1 אינדיקטור מחט). חוט או סרט מציין את זווית מפנה של המחט במהלך הניתוח לערער (איור 1). </li></ol> 2. בעלי חיים הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל מכשירי ניתוח צריך להיות autoclaved, מעוקר עם מעקר חרוזי זכוכית, או לחטא עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו משתמשים ספראג / Dawley חולדות בגיל הלידה 20-22 ימים (P20-22) או CD1 עכברים באותו גיל. זנים שונים של עכברים או חולדות עשוי לשמש לפרויקטים ספציפיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם זריקה ip של קטמין 80 מ"ג / ק"ג ו xylazine 8 מ"ג / ק"ג. הליך כירורגי מתחיל אחרי החיה אינו מגיב קמצוץ הזנב. במהלך הניתוח, במידת הצורך, במינון של המאיץ שליש מנה המקורי של קוקטייל ההרדמה יכולה להינתן כדי לשחזר את המצב המקורי הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את השיער על הקרקפת של החיה עם גוזם שיער חשמלי. למרוח כמות קטנה של משחה עיניים על העיניים של החיה להגנה מפני יובש במהלך ההרדמה. לחטא את הקרקפת בעזרת 10% povidone-יוד פתרון, ואחריו אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר חיה על מנגנון stereotaxic לשמור את הראש בתנוחה קבועה ויציבה. במהלך הניתוח, אנו שומרים את החיה על כרית חימום כדי למנוע היפותרמיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך קו האמצע קדמית, אחורית על הקרקפת בעזרת אזמל, המשתרעת למבדה אל בין העיניים. השתמש hemostats למשוך את העור בצד שמאל לחשוף את הגולגולת מספיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך מלבני בגולגולת משמאל, ולהשתמש אזמל כדי לגרד periosteum. צעד זה יקטין דימום להקל קידוח בגולגולת. </li></ol> 3. ביצוע פוגע <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת כמות קטנה של תמיסת מלח סטרילית על לאזור גולגולת חשופה, ולאחר מכן להשתמש Q-כמה טיפים כדי לנקות דם יבש את האזור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ כירורגי, להתחיל קידוח חריץ מלבני (~ 5 x 7 מ"מ בחולדות, 4 x 5 מ"מ בעכברים) על מרכז הגולגולת שמאל (כ לעיל שמאל הסנסורית הקורטקס). מריחת טיפה של מלח על הגולגולת מאפשר קידוח החום מתפוגג. אחרי עומק כ 2 / 3 של העצם הוא קדח, להסיר עודף מלח לנקות את אזור הקידוח עם Q-קצה. לאט לאט ובזהירות לקדוח עמוק עד פיסת מרכז העצם ניד על מגע עדין של מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים בזהירות את פיסת המרכזי של עצם על ידי הוספת טיפ חדה של מלקחיים על קצה העצם ולאט לאט מרימים את מלקחיים לחשוף את האונה השמאלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ כירורגי, תקרב את המכשיר לערער, ​​וכן לכוון את המחט לכיוון parasagittal ואת בניצב צלחת תומכת את המכשיר קו האמצע, הטיית מעט caudally כדי לשמור על ויזואליזציה של קצה המחט לאזור היעד קליפת המוח. כוון את קצה המחט מ"מ שטח 1-2 לרוחב תפר sagittal מעולה, באמצע החלון גולגולתי, ולמנוע חדירה ישירה של כלי גדול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את המחט בכיוון אופקי דרך הדורה ומתחת פיא כדי לחסוך כלי הדם. שב התחתון של המכשיר לערערעל שני הקצוות של החלון גולגולתי כך המחט ממוקם נורמלי אל פני השטח קליפת המוח (איור 1). די להציב את המכשיר על שני הקצוות של חלון הגולגולת ביד יהיה להקטין באופן משמעותי או לחסל ביד רועדת במהלך ההליך הבא. הרימו את המחט אל מתחת פיא, ואז לאט לאט להוריד אותו כדי ליצור חתך transcortical עד המחט לא יכול ללכת יותר עמוק. סובב ~ 135 ° הרחק קו האמצע כדי ליצור עניין חצי עיגול לבן / שכבה VI עמוק לערער. ואז להעלות את המחט שוב ​​מתחת פיא. הטה את המכשיר לאחור לשלוף את המחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, אפשר לחזור על התהליך הנ"ל (שלב 2.5), אבל מבלי להפוך את המחט כדי ליצור חתך transcortical נוספים בקצוות לרוחב החלון. פעולה זו תיצור בידוד קליפת המוח שלם יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים פיסת סרט פלסטי (6 x 6 מ"מ) על גבי החלון גולגולתי עבור הגנה תפר את הקרקפת. מניחים את חיה על משטח לוהט עד התאושש לחלוטין מן ההרדמה. </li></ol> 4. נציג התוצאות: פרוסות קליפת המוח העטרה יכול להיות מוכן לאשר את ההצלחה של הניתוח לערער. ב פרוסות מוכן&gt; 2 שבועות לאחר הניתוח, חותך transcortical ולערער ניכרים תחת המטרה צריכת חשמל נמוכה של מיקרוסקופ (איור 2). קליפת המוח מבודד חלקית בדרך כלל הופך מעט דק יותר, ופעילות epileptiform ניתן להבחין ברוב של פרוסות קליפת המוח עם הקלטה שדה פוטנציאלי (איור 3). ב היווצרות לעומת זאת, חורים גדולים בחומר הלבן או בשכבות קליפת המוח עמוק, דרמטי דילול של קליפת lesioned, או לחתוך תועה להיות מעל או מתחת החומר הלבן במוח יגרום שמיש עבור ניסויים נוספים. <img src="/files/ftp_upload/2840/2840fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. מבנה היישום של התקן לערער. צינורית המנחה (2) מודבק על גבי צלחת תמיכה (1) כי הוא עשוי נירוסטה או פלסטיק שקוף. מחט מזרק (3) מוחדר דרך צינורית המנחה והתכופף על 3 מ"מ ~ אל קצה. מחט להפסיק עשוי צינור פלסטיק מודבק על הקצה העליון של המחט כך נעים בטווח האנכית של המחט מוגבל ל 1.2 מ"מ ו ~ ~ 1.5 מ"מ לשימוש p21 עכברים וחולדות בהתאמה. קטע של חוט נחושת קטן מהודק מתחת לידית כאינדיקטור מחט על הכיוון של המחט כפופות. שים לב כי המכשיר מוטה ו במגע עם קצה שני של החלון גולגולתי כך חתך יכול להתבצע במקביל למשטח pial. <img src="/files/ftp_upload/2840/2840fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. תמונה מייצגת של פרוסת לערער. א תמונה פלורסנט פרוסת כי הוכנה שבועיים לאחר הנגע לערער על עכברוש P48. הפצע חיתוך סומן על ידי DiI פלורסנט לצבוע. חצים לבנים על הזכות להצביע לחתוך transcortical, ואת החצים בתחתית לערער עולה כי למרות עברו את הגבול בין שכבה IV ו החומר הלבן. <img src="/files/ftp_upload/2840/2840fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3. הקלטה שדה פוטנציאליים פרוסה לערער. שדה הקלטה פוטנציאליים פרוסה המוח לערער הציג פעילות epileptiform, דבר המצביע על לרגשנות יתר של רקמת קליפת המוח נפגע.

<ol><li>Hoffman, S. N., Salin, P. A., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+neocortical+epileptogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Chronic neocortical epileptogenesis in vitro.</a> J Neurophysiol. 71, 1762-1773 (1994).</li>
<li>Topolnik, L., Steriade, M., Timofeev, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperexcitability+of+intact+neurons+underlies+acute+development+of+trauma-related+electrographic+seizures+in+cats+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hyperexcitability of intact neurons underlies acute development of trauma-related electrographic seizures in cats in vivo.</a> Eur J Neurosci. 18, 486-496 (2003).</li>
<li>Graber, K., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGraber%2C+K+%22Models+of+Seizures+and+Epilepsy%22">Models of Seizures and Epilepsy</a>. , Elsevier. 477-493 (2005).</li>
<li>Nita, D. A., Cisse, Y., Timofeev, I., Steriade, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+propensity+to+seizures+after+chronic+cortical+deafferentation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Increased propensity to seizures after chronic cortical deafferentation in vivo.</a> J Neurophysiol. 95, 902-913 (2006).</li>
<li>Sharpless, S. K., Halpern, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electrical+excitability+of+chronically+isolated+cortex+studied+by+means+of+permanently+implanted+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The electrical excitability of chronically isolated cortex studied by means of permanently implanted electrodes.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 14, 244-255 (1962).</li>
<li>Echlin, F. A., Battista, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epileptiform+Seizures+from+Chronic+Isolated+Cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Epileptiform Seizures from Chronic Isolated Cortex.</a> Arch Neurol. 9, 154-170 (1963).</li>
<li>Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epileptogenic+neurons+and+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Neurol%22%5BJournal%5D)">Epileptogenic neurons and circuits.</a> Adv Neurol. 79, 665-684 (1999).</li>
<li>Marin-Padilla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+neuropathology+and+impact+of+perinatal+brain+damage.+II%3A+white+matter+lesions+of+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Developmental neuropathology and impact of perinatal brain damage. II: white matter lesions of the neocortex.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 56, 219-235 (1997).</li>
<li>Jin, X., Prince, D. A., Huguenard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitatory+synaptic+connectivity+in+layer+v+pyramidal+neurons+of+chronically+injured+epileptogenic+neocortex+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitatory synaptic connectivity in layer v pyramidal neurons of chronically injured epileptogenic neocortex in rats.</a> J Neurosci. 26, 4891-4900 (2006).</li>
<li>Li, H., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+activity+in+chronically+injured%2C+epileptogenic+sensory-motor+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic activity in chronically injured, epileptogenic sensory-motor neocortex.</a> J Neurophysiol. 88, 2-12 (2002).</li>
<li>Salin, P., Tseng, G. F., Hoffman, S., Parada, I., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+sprouting+in+layer+V+pyramidal+neurons+of+chronically+injured+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Axonal sprouting in layer V pyramidal neurons of chronically injured cerebral cortex.</a> J Neurosci. 15, 8234-8245 (1995).</li>
<li>Avramescu, S., Nita, D. A., Timofeev, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neocortical+post-traumatic+epileptogenesis+is+associated+with+loss+of+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Neocortical post-traumatic epileptogenesis is associated with loss of GABAergic neurons.</a> J Neurotrauma. 26, 799-812 (2009).</li>
<li>Avramescu, S., Timofeev, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+strength+modulation+after+cortical+trauma%3A+a+role+in+epileptogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic strength modulation after cortical trauma: a role in epileptogenesis.</a> J Neurosci. 28, 6760-6772 (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

המודל לערער היא מערכת היעילה ביותר ללימוד epileptogenesis פוסט. ניתוח טיפוסי לוקח רק כ 20-30 דקות לסיום, והוא עורר או פעילות ספונטנית epileptiform יכול להיות מוקלט פרוסות מרוב חיות שבועיים לאחר הניתוח 1-2. וחשוב יותר, המודל הזה מחקה ההיבטים של השינויים הבאים פגיעה מוחית טראומטית, כגון דימום axotomy דלקת, בצקת ומוות עצבי 7. לא רק פעילות epileptiform נצפו מכרסמים וחיות אחרות, אלא גם התקפים אפילפטיים תועדו אצל בני אדם הסובלים נגעים קורטיקליים דומים 8....

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> חומר שם </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Foredom micromotor ערכת </td><td> ציוד </td><td> Foredom </td><td> K.1070 </td></tr><tr><td> 1.5 אינץ 22-מד מזרק ומחט </td><td> חומר </td><td> BD החברה </td><td> 305156 </td></tr><tr><td> מזרק 1.5 אינץ 25-מחט מד </td><td> חומר </td><td> BD החברה </td><td> 305127 </td></tr><tr><td> Cyanoacrylate דבק </td><td> חומר </td><td> טד פלה </td><td> 14450 </td></tr></tbody></table>

הכנת דגם לערער של epileptogenesis פוסט במכרסמים

Preparing Undercut Model of Posttraumatic Epileptogenesis in Rodents

קליפת המוח מבודד חלקית (&quot;לערער&quot;) הוא מודל של בעל חיים epileptogenesis פוסט. הליך כירורגי כרוך חיתוך דרך קליפת המוח הסנסורית מתחת החומר הלבן (לערער), כך אזור מסוים בקליפת המוח מבודד במידה רבה בקליפת השכנות ואזורים קורטיקליים 1-3. לאחר ההשהיה של שבועיים או יותר לאחר הניתוח, הפרשות epileptiform יכול להיות מוקלט פרוסות המוח של מכרסמים 1; והתקפים חשמל או התנהגות ניתן להבחין in vivo ממינים אחרים, כגון חתול קוף 4-6. מודל זה מבוסס היטב חיה יעילה כדי ליצור מחקה מאפיינים חשובים של פגיעה מוחית טראומטית. עם זאת, הוא מאתגר מבחינה טכנית מנסה לעשות נגעים קורטיקליים המדויק במוח מכרסם קטן ביד חופשית. על פי הנוהל שנקבע בתחילה באוניברסיטת סטנפורד 1 במעבדה של ד&quot;ר דוד של הנסיך, כאן אנו מציגים טכניקה משופרת לבצע ניתוח להכנת מודל זה עכברים וחולדות. אנו מדגימים כיצד להפוך מכשיר כירורגי פשוט להשתמש בו כדי להשיג שליטה טובה יותר של חיתוך עומק וזווית להפיק תוצאות מדויקות יותר עקבית. המכשיר קל לעשות, ההליך הוא מהיר ללמוד. הדור של מודל זה החי מספק מערכת יעילה ללימוד על המנגנונים של epileptogenesis פוסט.

קליפת המוח מבודד חלקית (&quot;לערער&quot;) הוא מודל של בעל חיים יעיל epileptogenesis פוסט. כאן אנו מדגימים כיצד להפוך מכשיר כירורגי חדשני להשתמש בו כדי לבצע נגעים מדויקת יותר ועקבית כדי ליצור את המודל הזה.

הכנת דגם לערער של Epileptogenesis פוסט במכרסמים

קורטקס מבודל חלקית ("undercut") הוא מודל חייתי של אפילפטוגנזה פוסט-טראומטית. ההליך הכירורגי כולל חיתוך דרך ה...

נוהל זה ידגים כיצד להכין מודל של חיתוך (undercut) לאפיליפטוגנזה פוסט-טראומטית בחולדות. השלב הראשון הוא בניית מכשיר פשוט המשפר את הדיוק והעקביות של ניתוח החיתוך. לאחר מכן, בעל החיים מוכן לניתוח, ונחתך חלון קרניאלי על פני השגולה כדי לאפשר גישה למוח.לבסוף, מחטו של מכשיר החיתוך התחתי מוחדרת לחומר הלבן של קליפת המוח וסובבב כדי ליצור חיתוך תחתי בצורת מניפה באזור המטרה. בסופו של דבר, ניתן לקבל תוצאות המראות פעילות אפילפטית בפרוסות מוח באמצעות רישום פוטנציאל שדה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לבצע חיתוך מדויק ועקבי יותר באמצעות מכשיר כירורגי פשוט המיוצר בהתאמה אישית.ומודל חיות זה יכול לשמש למענה על שאלות מפתח הקשורות לאפילפטוגנזה לאחר פגיעה מוחית טראומטית. אף על פי ששימוש בעכברים נפוץ במחקרים אלו, ניתן להחיל את השיטה גם על עכברים. באופן כללי, אנשים שאינם מיומנים בשיטה זו עלולים להתקשות, מכיוון שיצירת נגע מדויק כזה בקליפת המוח של מכרסם באופן ידני היא מאתגרת.המכשיר הכירורגי מורכב משלושה חלקים: לוחית תמיכה, צינור מנחה ומחט מכופפת בזווית של 90 מעלות קרוב לקצה. כדי להכין מכשיר לחיתוך תת-רקמתי (undercut) לניתוח בחולדות בנות שלושה עד ארבעה שבועות, גזרו תחילה פיסה בעובי של 1 עד 1.5 מילימטר ובמידות של 7 עד 10 על 30 מילימטר מפלדת אל חלון או מפלסטיק שקוף בצורה מלבנית. כדי להכין את לוחית התמיכה, קחו מחט של מזרק בכי মাপ 25 ומחט של מזרק בכי মাপ 22 ומדדו את אורכה של מחט ה-25 gauge.בשלב הבא, חיתכו את הקצה הפלסטי של המחט מדג 22 ומדדו את אורך סימון המחט הכולל; חיתכו את המחט מדג 22 בנקודה כך שאורכו הסופי של צינור ההנחיה יהיה קצר בכ-5 עד 6 מילימטרים ממחט המזרק מדג 25. שייפו את הקצה כדי להחליקו ולהפחית את הבליטות. השתמשו בדבק ציאנואקרילט כדי לקבע את צינור ההנחיה ללוח התמיכה, תוך וידוא שהמחט ניצבת ומיושרת ביחס לקצה לוח התמיכה.החדירו את מחט המזרק בכילוי 25 אל תוך צינור ההנחיה וכופפו את המחט בזווית של 90 מעלות, במרחק של 2.5 עד שלושה מילימטרים מהקצה. לבסוף, חברו חוט נחושת קטן או חתיכת סרט דבק קטנה לקצה העליון של המחט, באותו כיוון של הקצה הכפוף.החוט או הסרט מציינים את זווית הפנייה של המחט במהלך ניתוח ה-undercut. לפני תחילת הליך זה, יש להתייעץ עם הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים כדי לקבל את האישור הדרוש לפעולות הבאות. ראשית, ודאו שכל כלי הניתוח עוקרו בשיטה מאושרת ושקיים שטח סטרילי לביצוע הניתוח.הרדימו את בעל החיים בהתאם לפרוטוקול המאושר, וודאו שהבעל חיים מורדם לחלוטין על ידי ביצוע צביטה בזנב. השתמשו בקוצץ חשמלי כדי לגזור את הפרווה מהקרקפת של בעל החיים סביב האזור שבו תבוצע החתך. לאחר מכן, חטאו את הקרקפת באמצעות תמיסת povidone iodine בריכוז 10%, ולאחריה Ethanol בריכוז 70%.מרחו פומדה אופטלמית על עיני בעל החיים כדי למנוע מהן להתייבש. במהלך הניתוח, קבעו את בעל החיים למכשיר סטריאוטקסי כדי לשמור על הראש במנח קבוע ויציב. מומלץ להניח את בעל החיים על פלטת חימום כדי למנוע היפותרמיה.בעזרת סקלפל, בצעו חתך קדמי-אחורי בקו האמצע של קרקפת, המשתרע מה-Lambda ועד למרווח שבין העיניים. לאחר מכן, השתמשו בפינצטות המוסטטיות (hemostats) כדי להזיז את העור לצדדים ולחשוף באופן מספיק את הצד השמאלי של הגולגולת. השתמשו בסקלפל כדי לבצע חתך מלבני בצד שמאל של הגולגולת ולהסיר את הפריאוסטום (periosteum) על ידי גירוד.שלב זה יפחית את הדימום ויקל על הקידוח בגולגולת. ראשית, נקה את הגולגולת באמצעות סליין סטרילי ומספר מקלוני צמר גפן (Q-tips) כדי להסיר דם ולייבש את האזור. לאחר מכן, הנח טיפה של סליין סטרילי במרכז הצד השמאלי של הגולגולת.לאחר מכן, התחילו בקידוח כדי ליצור חריץ מלבני בגודל ארבעה על חמישה מילימטרים במרכז הצד השמאלי של הגולגולת. לאחר שנקדחו כשני שלישים מעומק העצם, הסירו את עודפי התמיס המלוחי ונקו את האזור הקדוח באמצעות מקלוני אוזניים (Q-tip). המשיכו לקדוח בעדינות ובזהירות לעומק רב יותר, עד שפיסת העצם המרכזית תהיה ניתנת להזזה באמצעות נגיעה קלה עם פינצטה.הסר בזהירות את פיסת העצם המרכזית על ידי אחיזה עדינה בפיסת העצם בעזרת פינצטה והרמה איטית של חלון העצם כדי לחשוף את ההמיספרה השמאלית, תוך כדי החזקת מכשיר ה-undercut. כוון את המחט לכיוון פרה-סגיטלי ואת לוח התמיכה בניצב לקו האמצע. כוון את קצה המחט למרחק של מילימטר אחד עד שניים לטרלית לתפר הסגיטלי העליון במרכז החלון הגולגולתי, תוך הימנעות מכלי דם גדולים.בשלב הבא, הכניסו את המחט בכיוון אופקי דרך הקודורה (dura) ומתחת למחסום (pier). כדי לחסוך בכלי דם, הניחו את בסיס מכשיר החיתוך על שני קצוות החלון הגולגולתי כך שהמחט תמוקם בניצב לפני השטח של הקורטקס. ודאו שהמחט נמצאת מתחת למחסום על ידי הרמה קלה שלה.לאחר מכן, הורידו באיטיות את המחט כדי ליצור חתך טרנסקורטיקלי (transcortical cut) עד שהמחט לא תוכל לחדור הלאה. בשלב הבא, סובבו את המחט ב-180 מעלות הרחק מקו האמצע כדי ליצור חתך תת-שכבתי (undercut) בצורת חצי עיגול בשכבה 6 העמוקה של החומר הלבן. לבסוף, הרימו שוב את המחט עד שתהיה מתחת למסך (pier).לאחר מכן, הטה את מכשיר ה-undercut לאחור והוצא את המחט. הנח חתיכת פילם פלסטי על החלון הגולגולתי להגנה. לאחר מכן, שחרר את התופסנים (hemostats), הרטב את הקרקפת בתמיסת סליין סטרילית במידת הצורך, והחזר אותה למקומה.סגרו את החתך באמצעות תפרים. לאחר מכן, שחררו את בעל החיים מהמכשיר הסטריאוטקסי והניחו אותו על פד חימום עד להתאוששותו מההרדמה. לאחר החזרת בעל החיים לכלוב הביתי, הקפידו לספק משככי כאבים בהתאם לפרוטוקול ה-IA iacuc הרלוונטי.כאן, נתחי קליפה קורונליים הוכנו שבועיים לאחר הפרוצדורה כדי להעריך את הצלחת ניתוח החתירה (undercut surgery). חתכים טרנסקורטיקליים וחתכים תחתונים ניתנים לזיהוי תחת עדשה בעלת הגדלה נמוכה של מיקרוסקופ. הקלטה זו של פוטנציאל שדה חושפת פעילות חשמלית שנקראה בעקבות גירוי בקליפה שבודדה באופן חלקי.לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בכ-30 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לתרגל את השימוש במכשיר הניתוחי לפני הניתוח. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה כיצד להכין מודל לא חתוך של epileptogenesis פוסט-טראומטי במכרסמים.

preparing-undercut-model-of-posttraumatic-epileptogenesis-in-rodents

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מדגים רישום אלקטרואנצפלוגרפי (EEG) של התקפים אפילפטיים בחולדות המושרות על ידי אפילפסיה. חולדה עם אלקטרודות שהושתלו בהיפוקמפוס הגחוני מחוברת למערכת רישום EEG וממוקמת בתא פרספקס. החולדה מורשית לנוע בחופשיות בזמן שפעילות המוח נרשמת כדי לעקוב אחר התרחשות ההתקפים.

רישום אלקטרואנצפלוגרפי של התקפים אפילפטיים בחולדות המושרות על ידי אפילפסיה

מקור: Jang, S., et al, התקפים בנזעי חשמל בחולדות ופיצול ההיפוקמפוס שלהם כדי לבחון שינויים הנגרמים על ידי התקפים בחלבוני צפיפות פוסט-סינפטיים. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים את השראת התקף נזעי חשמל חריף (ECS) במודל חולדה כדי לחקור נוירופלסטיות הנגרמת על ידי התקפים. חוקרים מפעילים גירוי חשמלי באמצעות אלקטרודות אטב אוזניים, מה שמפעיל ריגוש יתר עצבי וקלונוס. מודל זה מסייע לחקור פלסטיות סינפטית, מנגנוני התקפים והשפעות טיפוליות הקשורות לטיפול בנזעי חשמל (ECT).

גרימת התקף נזעי חשמל חריף במודל חולדה

כאן אנו מדגימים את השימוש בטכנולוגיה אלחוטית המאפשרת אלקטרואנצפלוגרמה (EEG) במודלים של מכרסמים בילודים של מחלות אנושיות. עם טלמטריה, אין חיבורים מכבידים, ובכך מאפשרים התנהגויות טבעיות.

ניטור EEG הרציף ארוך טווח במודלים של מכרסמים קטנים של מחלות אנושיות באמצעות מערכת אפוק משדר אלחוטי

סרטון זה מציג את הליכי ההכנה, ההקלטה וניתוח המקור של EEG ברזולוציה גבוהה על חולדות מורדמות עם מודל פרה-קליני מסוים של אפילפסיה מוקדית בתנאים לא פולשניים.

הדמיה מקור מוח במודלים פרה עכברוש של מיקוד אפילפסיה באמצעות רזולוציה גבוהה EEG הקלטות

פרוטוקול זה מתאר שיטה של הצתה כימי עם pentylenetetrazole ומספק דגם העכבר של אפילפסיה. פרוטוקול זה יכול לשמש גם כדי לחקור את הפגיעות פרכוס אינדוקציה, פתוגנזה לאחר התקפים אפילפטיים בעכברים.

דגם העכבר מתמצקים הנוצרות על-ידי Pentylenetetrazole

מודלים התקף אקוטי חשובים ללמוד המנגנונים אפילפטית אירועים. יתר על כן, היכולת להפיק אפילפטית אירועים לפי-דרישה מספק שיטה יעילה במיוחד ללמוד רצף האירועים שבבסיס בהכנסתם המדויק. כאן, אנו מתארים את הדגמים פרכוס קורטיקלית פמפרידין חריפה נוסדה בשנת רקמה אנושית של עכבר.

חניכה הדור, על פי דרישה חריפה פעילות התקפי. מכרסם, רקמה אנושית

פרוטוקול שיטתי זה מתאר מודל חדש לבעלי חיים של אפילפסיה פוסט-טראומטית לאחר פגיעה קלה במוח הטראומטי. החלק הראשון לפרטים צעדים לפגיעה מוחית טראומטית אינדוקציה באמצעות מודל שונה ירידה במשקל. החלק השני מספק הנחיות לגבי הגישה הכירורגית עבור מערכות מידע חד-ערוצית לרכישת נתונים אלקטרונצלוגרפיה.

גרימת אפילפסיה פוסט טראומטית במודל עכבר של פגיעה במוח החוזר ומפוזר טראומטי

כאן, אנו מתארים את הכנת פרוסות אורגנוטיפיק קליפת המוח הריאנלית-היפוקמפוס. תחת קיפוח הדרגתי ומבוקר של סרום, פרוסות אלה מתארות אירועים מתפתחים דמויי אפילפטיים ויכולים להיחשב מודל אקס ויוו של אפילפטוגנזה. מערכת זו מייצגת כלי מצוין לניטור הדינמיקה של פעילות ספונטנית, כמו גם להערכת ההתקדמות של תכונות נוירואינפלמטוריות לאורך כל מהלך אפילפטוגנזה.

מודל של אפילפטוגנזה בתרבויות פרוסות קליפת המוח-היפוקמפוס של רינאל קליפת המוח

דו"ח זה מתאר את השיטות ליצירת מודל של אפילפסיה של האונה הרקתית המבוסס על הצתה חשמלית של עכברי VGAT-Cre טרנסגניים. עכברי VGAT-Cre עשויים להיות שימושיים בקביעת הגורמים לאפילפסיה ולהקרנת טיפולים חדשניים.

הכנה והשתלה של אלקטרודות להצתה חשמלית של עכברי VGAT-Cre ליצירת מודל לאפילפסיה של האונה הרקתית

זיהום תוך-מוחי בנגיף האנצפלומיאליטיס מורין (TMEV) בעכברי C57BL/6 משכפל רבים מהתסמינים הקליניים המוקדמים והכרוניים של דלקת המוח הנגיפית ואפילפסיה שלאחר מכן בחולים אנושיים. מאמר זה מתאר את זיהום הנגיף, הסימפטומים וההיסטופתולוגיה של מודל TMEV.

מודל לאפילפסיה של אטיולוגיה זיהומית באמצעות וירוס Murine Encephalomyelitis של Theiler

האמיגדלה ממלאת תפקיד מפתח באפילפסיה של האונה הרקתית, שמקורה במבנה זה ומתפשטת ממנו. מאמר זה מספק תיאור מפורט של ייצור אלקטרודות מוח עמוקות עם פונקציות הקלטה וגירוי כאחד. הוא מציג מודל של אפילפסיה של האונה הרקתית האמצעית שמקורה באמיגדלה.

שימוש באלקטרודה דו-קוטבית ליצירת מודל עכבר אפילפסיה של האונה הרקתית על ידי הצתה חשמלית של האמיגדלה

למדו להכין דגם undercut של אפילפטוגנזה פוסט-טראומטית בעכברושים באמצעות מכשיר כירורגי מותאם אישית. שיטה זו מאפשרת יצירת פציעות מדויקות בעורף להבנת מנגנוני האפילפסיה.

הכנת דגם לערער של Epileptogenesis פוסט במכרסמים

גלה סרטונים נוספים