Name: קשירת Cecal נקר נוהל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: למדו את מודל קשירת המעי הגס וניקורו בעכברים C57BL/6 לחקר דלקת מערכתית. שיטה זו מאפשרת לחקור תגובות חיסוניות ונזק לאיברים בזיהום פולימיקרוביאלי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם משרד הבריאות של פנסילבניה. ד&quot;ר מיגל גרסיה Toscano היה בחור דוקטורט באוניברסיטת טמפל, שמומן על ידי אלפונסו מרטין Escudero הקרן במהלך מחקר זה. אנו רוצים להודות איליה Yordanov וקווין Kotredes לביצוע של הווידאו.

1. קשירת נקר Cecal וכן במודל של עכברים של אלח דם האדם עבור C57BL הליך זה / 6 עכברים (7-9 שבועות) משמשים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר על ידי הזרקת intraperitoneally פתרון של 01:01 קטמין (75mg/kg) ו xylazine (15mg/kg). כנקודת התייחסות, להזריק 30 μl של הפתרון 01:01 לעכבר במשקל 20 גרם. לחלופין, עכברים יכולים להיות מורדם עם isoflurane בשאיפה באמצעות מאדה הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הבטן של העכבר ולחטא האזור על ידי יישום הפתרון הראשון בבטאדין ואחריו מנגב עם ספוגית אלכוהול 70% (מספר 1 ברצף בתמונה למטה). Chlorhexidine יכול לשמש חיטוי אלטרנטיבה. אופציונלי: וילון סטרילי ניתן להשתמש כדי לשמור על האזור נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתנאים aseptic, תרגול laparotomy 1-2 ס"מ קו האמצע ולחשוף את cecum עם המעי הסמוך (2 ו -3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum היא ligated הדוק עם תפר 6.0 משי (6-0 PROLENE, 8680G, Ethicon) בבסיסו מתחת שסתום ileo-cecal, והוא מחורר פעם או פעמיים עם מחט 19-מד (4 ו - 5) על אותו בצד של cecum. שים לב את אורך cecum ligated כהגדרתו המרחק מהקצה הדיסטלי של cecum לנקודה קשירת תקבע את מידת החומרה. מרחק של&gt; 1cm מייצרת אלח דם ציון גבוה תוך מרחק של 1 ס"מ ≤ מייצרת אמצע אלח דם נמוך בכיתה. כמו כן שים לב באמצעות שיטת ניקוב cecal המוצג כאן הוא שונה מן הסטנדרט ולפנים טכניקה לנקב (החדרת מחט דרך cecum). שתי השיטות אמין לייצר את התוצאה אלח דם זהה. עם זאת, חיסרון אחד של הטכניקה ולפנים היא שזה לא לאפשר שליטה על כמות הצואה extruded כאשר cecum נסחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cecum אז היא לחצה בעדינות extrude כמות קטנה של צואה מאתרי ניקוב (6). Cecum הוא חזר אל חלל הצפק ואת הצפק סגור עם 6.0 התפרים משי. (7). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העור הוא סגור עם קליפים 7mm רפלקס (RS-9258, מכשירים Roboz כירורגי) או קליפים מישל הפצע (7 מ"מ, RS-9270) (8). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החייאה על ידי הזרקה תת עורית עכברים 1 מ"ל של תמיסת מלח מחומם מראש 0.9% באמצעות מחט 25 גרם. צעד זה החייאה נוזל יניעו את השלב hyperdynamic של אלח דם. צעד זה קריטי מתואר נוסף בסעיף הדיון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: להזריק תת עורי עצירות (0.05mg / משקל גוף ק"ג) או tramadol (משקל הגוף 20mg/kg) על כאבים שלאחר הניתוח. שים לב לכך אופיאטים אלה יכולים לדכא את הנשימה לתנועה ואת ההשפעות הללו ניתן לפרשנות מוטעית כאילו סימנים של אלח דם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיות ממוקמים באופן זמני על כרית חימום או לחילופין חזר מיד בכלוב עם חשיפה מנורת חימום אינפרא אדום של 150W עד שהם להתאושש מן ההרדמה. זמן ההחלמה הוא בין 30-1 דקות לשעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתן גישה חופשית מזון ומים (הידרוג'ל) שהונחו על הקרקעית של הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מנוטרים כל 12 שעות עבור ההישרדות של שבוע עד שבועיים או מורדמים בנקודות זמן שונות לניתוח פרמטרים שונים. </li></ol> כמו לשלוט על עיצוב ניסיוני, חיות דמה יעקבו את הטכניקה laparotomy ללא קשירת ו לנקב. שש עד 12 שעות אחרי העכברים הליך כירורגי יהיה רדום ולהתפתח, piloerection חום, שלשולים, מתכרבלים, וחולשה, כל הסימפטומים של אלח דם. עכברים עם אלח דם חמור מאוד בקושי יכול לזוז לפני מותו ולהציג ירידה דרמטית בחום הגוף. בשלב זה עכברים צעד צריך להיות מורדמים, כדי למנוע סבל ממושך. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="איור 0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 0"> 2. פרמטרים ניתחתי שכיחים כדי להעריך את תוצאות ההליך, פרמטרים שונים ניתן לנתח באיברים, תמציות התא או נוזלי גוף. דוגמאות ניתן לאסוף בנקודות זמן שונות מ 3 שעות בשבוע אחד לאחר ההליך הכירורגי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים הישרדות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציטוקינים ו chemokines בחלל, סרום הצפק ותמציות איברים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Interleukin-6: הופק ושוחרר על ידי מונוציטים, תאים דנדריטיים, מקרופאגים, תאים B, ותאי T, גרנולוציטים, תאים התורן סוגי תאים רבים יותר. זה ממלא תפקיד חשוב בתגובה שלב דלקת חריפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גידול גורם נמק-α: ציטוקין Pleiotrophic כי תפקיד מרכזי בתהליכים דלקתיים אפופטוזיס. הופק על ידי מונוציטים, מקרופאגים, נויטרופילים, התאים הדנדריטים וגם fibroblasts. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> nterleukin-1β: הופק על ידי מונוציטים, תאים NK, תאים דנדריטים, תאים B ותאי T. גורם חום חריפה סינתזה חלבון שלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטרלויקין 10: מקדם ספיגת phagocytic ותגובות Th2 אבל מדכא antigen מצגת Th1 תגובות מעודדי דלקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטרלויקין 10: מקדם ספיגת phagocytic ותגובות Th2 אבל מדכא מצגת אנטיגן ואת Th1 תגובות מעודדי דלקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מונוציטים chemotactic חלבון-1 (הידוע גם בשם CCL2): מגייסת ומונוציטים, תאים T זיכרון, תאים דנדריטים לאתרים של פגיעה ברקמות זיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> KC (CXCL1): הופק על ידי מקרופאגים ותאי האנדותל. עכבר KC הוא attractant נויטרופילים חזק activator. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RANTES: chemoattractant מונוציטים. זה יכול chemoattract unstimulated CD4 + / CD45RO + T זיכרון תאים מסוג CD4 + ו מגורה CD8 + T תאים עם יש na ו פנוטיפים זיכרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטרפרון-γ: מופרש על ידי תאים Th1, ותאי T ציטוטוקסיים, תאים דנדריטים טבעי (NK) תאים הרוצח. מגביר מצגת אנטיגן ופעילות ממס ב מקרופאגים ומדכא פעילות התא Th2. מקדם הדבקה ומחייבת נדרש הגירה ליקוציט ומקדמת פעילות התא NK. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניידות גבוהה מקבוצה B-1 חלבון: ב מונוציטים הוא גורם גרעינית activator kappa B באמצעות קשירה לקולטן התאי glycation לקדם מוצרי קצה (בכעס), הפעלת את שחרורם של מתווכים מעודדי דלקת בשלב מאוחר של אלח דם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Myeloperoxidase נחישות באיברים כאמצעי של חדירת נויטרופילים. Myeloperoxidase (MPO) הוא האנזים peroxidase ביותר כיום בשפע גרנולוציטים נויטרופילים. זהו חלבון lysosomal מאוחסנים גרגרי azurophilic של נויטרופילים. MPO יש פיגמנט heme, מה שגורם הצבע הירוק שלה בהפרשות עשיר נויטרופילים, כמו מוגלה כמה צורות של ריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיידקים לטעון איברים זרם דם, למדוד כמספר המושבה הקמת יחידות למיליליטר. </li></ol> 3. נציג תוצאות ההליך CLP בוצעה תחילה זן C57BL / 6 העכבר. בדקנו מספר פרמטרים לווסת את חומרת אלח דם על ידי שינוי אורך של קשירת ועובי המחט כפי שמוצג איורים 1 ו -2. בין שני הגורמים הללו, אורכו של קשירת נראה להיות יעיל יותר מאשר עובי המחט לשנות את אחוז ההישרדות. כפי שניתן לראות בתרשים 1, להגדיל את אורך של קשירת על ידי יותר מ 1cm מעורר עלייה בתמותה של 100% בהשוואה לעכברים שיש קשירת של ≤ 1cm. הגדלת עובי המחט גם ירד אחוז ההישרדות מ -100% (באמצעות מחט 22g) ל -55% (באמצעות מחט 19G) ובה שני חורים. כמו כן, אנו נבחן את ההשפעה של CLP על C57BL / 6 129SvJ עכברים כדי לקבוע אם העכבר זנים שונים להציג רגישות דומה או ברורים אלח דם CLP-Induced. איור 3 מראה כי בתנאים זהים, עכברים 129SvJ היו רגישים יותר זיהום מאשר C57BL / 6, שמסומן על ידי אחוז תמותה מוגברת. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. השפעת אורך של קשירת cecum בהישרדות של בעלי חיים. CLP בוצעה C57BL / 6 עכברים באמצעות שני אורכים שונים של קשירת cecal. זה פרמטר אחד משפיעה באופן דרמטי מאז הישרדות בעלי חיים כל בעלי החיים בקבוצה עם שטח קשירת יותר מ 1 ס"מ מתו פחות מ 3 ימים בהשוואה לקבוצה של בעלי חיים באזור בעל קשירת של כ 1 ס"מ. (N = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. השפעת עובי המחט על הישרדות. CLP בוצעה C57BL / 6 בעכברים באמצעות מחט בשני גדלים שונים, 19G ו - 22g. עכברים עם cecum מחורר באמצעות מחט 19G הראו הישרדות 55-60%. לעומת זאת, בעכברים עם cecum מחורר באמצעות מחט 22g הראו הישרדות של 100% למרות שהם חוו תסמינים אופייניים של דלקת בימים 3-4 הראשון, אשר נעלם לאחר 4 ימים (n = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3. השוואה בין הרגישות אלח דם בין שני זנים שונים העכבר. המודל CLP בוצעה 129SvJ C57BL ו / 6, בתנאים זהים. בתום תקופת ההערכה הישרדות אחוז המתח 129SvJ היה 25% פחות מאשר זן C57BL / 6, המציין רגישות גבוהה יותר לדלקת הנגרמת על ידי זיהום polymicrobial. (N = 6).

<ol><li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States%3A+analysis+of+incidence%2C+outcome%2C+and+associated+costs+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li>
<li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enigma+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li>
<li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li>
<li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li>
<li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li>
<li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury%2C+inflammation%2C+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li>
<li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li>
<li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li>
<li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li>
<li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li>
<li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AP214%2C+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone%2C+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li>
<li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li>
<li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li>
<li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.<br /&gt; ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם המכון הלאומי מדריך הבריאות טיפול ושימוש בחיות מעבדה, ואושר על ידי טיפול בבעלי חיים ועדה להשתמש באוניברסיטת טמפל.

כאן אנחנו מראים בפירוט כיצד לבצע את מודל CLP בעכברים לווסת את כיתה של חומרה. בהשוואה במודלים של בעלי חיים אחרים של אלח דם, CLP ניתן לבצע כל זן של העכבר גיל, מין שונות. זהו הליך ניתוחי קל יחסית ולא יקר. במודל זה, הציון של חומרה יש השפעה ישירה על אחוז ההישרדות. אורכו של קשירת, עובי המחט ומספר דקירות פרמטרים שניתן לשלוט לווסת את חומרת / תמותה של CLP. כתוצאה מכך, כדי להשיג שינויים דרמטיים חומרת CLP, המשתמש יכול לשנות...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> קטמין </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> AnaSed </td><td> נדא # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> מזרק אינסולין 29G </td><td> אקסל </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> משי תפר, 6-0 PROLENE </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G ו 25 גרם מחט </td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> מגלח </td><td> כללי ההיצע </td><td> כללי ההיצע </td><td></td></tr><tr><td> מנורת חימום אינפרא אדום </td><td> כללי ההיצע </td><td> כללי ההיצע </td><td></td></tr><tr><td> מישל פצע קליפים 7mm </td><td> Roboz כירורגי InStr </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> האוזן מסכת Loop </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Dissection מספריים </td><td> Roboz כירורגי InStr </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> בבטאדין פתרון </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> כירורגי מלקחיים </td><td> Roboz כירורגי InStr </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> 70% משטח איזופרופיל אלכוהול </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> עצירות </td><td> בדפורד Labs </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tramadol </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

קשירת cecal נקר נוהל

Cecal Ligation Puncture Procedure

אלח דם האדם מאופיין על ידי סדרה של תגובות מערכתיות בתגובה זיהום אינטנסיבי מאסיבי שלא הצליחו להיכלל באופן מקומי על ידי המארח. נכון לעכשיו, אלח דם מדרג בין עשרת הגורמים העליון של התמותה ביחידות טיפול נמרץ ארה&quot;ב 1. במהלך אלח דם ישנם שני שלבים haemodynamic נקבע כי עשויים לחפוף. השלב הראשוני (hyperdynamic) מוגדר ייצור מסיבי של ציטוקינים מעודדי דלקת ו מינים החמצן מגיב על ידי מאקרופאגים נויטרופילים המשפיעה על החדירות של כלי הדם (המוביל תת לחץ דם), תפקוד הלב וגורם לשינויים מטבוליים שהגיעה לשיאה נמק רקמות כשל איברים. כתוצאה מכך, הגורם השכיח ביותר לתמותה היא פגיעה כליות חריפה. השלב השני (hypodynamic) הוא תהליך אנטי דלקתיות מעורבים אנטיגן שינו במצגת מונוציטים, ירידה ריבוי לימפוציטים ועל התפקוד אפופטוזיס מוגבר. מצב זה המכונה החיסון או דיכאון החיסונית בחדות מעלה את הסיכון לזיהומים nocosomial ובסופו של דבר, למוות. מנגנונים של תהליכים אלה pathophysiological לא מאופיינים היטב. מכיוון שגם השלבים של אלח דם עלול לגרום לנזק בלתי הפיך וחסר תקנה, זה הכרחי על מנת לקבוע את מעמדם החיסונית הפיזיולוגי של המטופל. זו הסיבה העיקרית מדוע תרופות טיפוליות רבות נכשלו. התרופה ניתנה אותו בשלבים שונים של אלח דם עלול להיות מזיק או טיפולית אחרת או אין השפעה 2,3. אלח דם כדי להבין ברמות שונות חשוב מאוד להיות מודל החיה מתאימה ומקיפה שמעתיק את המסלול הקליני של המחלה. חשוב לאפיין את מנגנוני pathophysiological המתרחשים במהלך אלח דם ושליטה התנאים מודל לבדיקה סוכני טיפולית פוטנציאליים. כדי לחקור את האטיולוגיה של חוקרים אלח דם האדם פיתחו מודלים של בעלי חיים שונים. המודל הקליני הנפוץ ביותר הוא קשירת לנקב cecal ו (CLP). המודל CLP מורכב ניקוב של cecum המאפשר שחרור של חומר צואתי לתוך חלל הצפק כדי לייצר תגובה חיסונית החריפה הנגרמת על ידי זיהום polymicrobial. מודל זה ממלא את המצב האנושי שהוא רלוונטי מבחינה קלינית. כמו אצל בני אדם, עכברים לעבור CLP עם החייאה נוזל להראות את השלב הראשון (מוקדם) hyperdynamic כי בזמן התקדמות לשלב (ז&quot;ל) שנית hypodynamic. בנוסף, ציטוקינים פרופיל דומה לזה לראות אלח דם האדם, שם הוא גדל אפופטוזיס הלימפוציטים (הנסקרת ב 4,5). בשל מנגנונים מרובים חופפים מעורב אלח דם, החוקרים צריכים מודל אלח דם מתאים לחומרת מבוקר כדי להשיג תוצאות עקביות לשחזור.

במודל עכבר של קשירת לנקב cecal ו ככלי רב ערך לחקר אלח דם האדם.

קשירת Cecal נקר נוהל

אלספסיס אנושית מאופיינת על ידי מערך של תגובות סיסטמיות כמענה לזיהום אינטנסיבי ומסיבי שלא ניתן היה להכילו באופן מקומי על ידי ה...

שלום, שמי מיגל טוסקאנו מהמעבדה של ד"ר דנה במחלקה למיקרוביולוגיה והמטולוגיה באוניברסיטת טמפל. היום נראה לכם כיצד להקים את מודל ה-iCal allegation והניקור בזן העכבר C 57 Black Seas. אנו משתמשים במודל זה במעבדתנו כדי לדמות אלח דם (ספסיס) אנושי.בעיקר, מודל זה מבוסס על נקב ברום (seum), המאפשר שחרור של חומר צואי אל החלל הפריטונאלי כדי ליצור ספסיס פולימיקרוביאלי, ובכך להגדיר תגובה חיסונית מוגברת. במודל זה, איברים רבים וסוגי תאים שונים נפגעים באופן בלתי הפיך. הדבר עשוי להוביל בסופו של דבר למותו של בעל החיים.בואו נתחיל. הרדמת העכבר. השלב הראשון הוא הרדמת בעל החיים באמצעות הזרקה תוך-פריטוניאלית.תערובת ביחס של אחד לאחד של Ketamine ו-xylazine. כדי למנוע נשיכות של העכבר וכדי להימנע מפגיעה בו, יש לתפוס את העכבר בזנבו ביד אחת. ביד השנייה, נלחץ את גבו כנגד הרצפה.לאחר מכן ניתן לתפוס את העכבר בחלק האחורי של הראש ולהפנות את החיה על גבה כדי לחשוף את הבטן. באמצעות מזרק אינסולין בכיסוי (gauge) 29, מזריקים 20 עד 30 µL של חומר ההרדמה לחלל הפריטונאום. כחלק מהכנת העכבר להליך, תפסו את גב העכבר וגלחו את בטנו תוך כדי לחיצה על הזנב ו/או על רגלו של העכבר.אנו בודקים שהעכבר אינו רגיש לכאב, ולאחר מכן מחטאים את הבטן. ראשית על ידי קרצוף עם תמיסת Betadine, ולאחריה ניגוב עם מגבון isopropyl alcohol למשך דקה אחת לפחות. ביצוע הלפרוטומיה: כדי לבצע לפרוטומיה, אנו מרים את העור במרכז הבטן בעזרת הפינצטה ומבצעים חתך קטן באורך של כסנטימטר אחד.לאחר מכן, הרימו את הפרינאום ובצעו חתך קטן נוסף כדי לחשוף את חלל הפריטונאום. בעזרת פינצטה קמורה, החזיקו את קרום הפריטונאום. זהו וחשפו את העקום על ידי העברתו דרך קרום הפריטונאום.מקמו אותו מעל הבטן. זהו רגע הליגציה (קישור). זהו גורם חשוב.על מנת לקבוע את חומרתו של המודל, ניתן לווסת את חומרת הפרוצדורה. בהתאם להיקף הליגציה, העכברים יפתחו ספסיס קלה יותר. אם הליגציה תבוצע קרוב לקצה העקום (cecum), תתפתח ספסיס קלה; אם תבוצע במרכז, תתפתח ספסיס בדרגת ביניים; ואם תבוצע קרוב לשסתום המעי הדק והעקום (ileocecal valve), תתפתח ספסיס חמורה. חומרת הפרוצדורה תבוא לידי ביטוי באחוז התמותה.לעולם אל תקשרו את השסתום האיליו-צקאלי (ileocecal valve). כעת בצעו את הקשירה באמצעות תפר משי עם קשר כפול כדי להבטיח שהיא תהיה הדוקה, ובצעו את הדקירה: החזיקו את העקום (cecum) ובצעו בזהירות דקירה קרוב לאתר הקשירה, ודקירה נוספת קרוב יותר לקצה העקום. ממברנת העקום רכה ותישבק בקלות רבה.באמצעות שימוש במחטים בעוביים שונים וביצוע נקב אחד או שניים, ניתן גם לווסת את חומרת המודל. שיטת הנקב הבודד או הכפול המוצגת כאן היא טכניקה חלופית לנקב הרצף הקלאסי (through and through sequel puncture). היתרון בשימוש בשיטת הנקב הבודד או הכפול הוא היכולת לשלוט טוב יותר בכמות הצואה הנפרשת בעת לחיצה על ה-cecum.החזיקו את העקום בשתי אצבעות וסחקו אותו בעדינות כדי להוציא כמות קטנה מאוד של צואה. לאחר סגירת הלפרוטומיה, הרימו את הפריטונאום והחזירו בזהירות את העקום לחלל הפריטונאום.הקפידו מאוד להימנע מדקירה מקרית של העקום (cecum). מומלץ להשתמש בפינצטה גדולה יותר. כעת יש לסגור את חלל הפריטונאום. בעזרת תפרי משי, חשוב מאוד לוודא כי הסגירה בוצעה היטב.נתחיל מצד אחד של הפצע שבו נבצע קשר. נמשיך בתפירה עד לצד השני על ידי העברת המשי תחת הלולאה של הדקירה הקודמת. כדי לסגור את העור, ניתן להשתמש בסגורי פצעים מסוג Mitchell או בסגורי reflex, תוך שימוש בכלי המתאים לסגירת הסגורים.מקמו מספר אטבים ככל שנדרש כדי לוודא שהפצע סגור. בצעו החייאה לעכברים על ידי הזרקה תת-עורית של 1 mL תמיסת סלין שחוממה מראש. באמצעות מחט בכיול 25 gauge, מדד החייאה בנוזלים זה יגרום לשלב ההיפר-דינמי של אלח דם (sepsis), ובכך יסתיים ההליך.מקם את העכבר תחת מנורת חימום אינפרה-אדומה, או לחלופין על משטח חימום, עד שהעכבר יתאושש מההרדמה. ספק מזון ומים על רצפת הכלוב והשגח על בעלי החיים בכל שמונה עד 12 שעות כדי לזהות סימני מחלה. הזרק buprenorphine באופן תת-עורי לשיכוך כאבים לאחר הניתוח.משכך כאבים אחר שניתן להשתמש בו הוא T.Tramadol. סימנים של אלח דם ותסמינים של אלח דם הם חום, לתרגיה, פרווה זקופה, זקפה, שלשול, התקבצות (huddling) ומצב כללי רע. בעלי חיים חולים מאוד מראים ירידה חמורה בטמפרטורת הגוף ובקושי זזים כדי למנוע סבל.בשלב זה יש להקלי them (הדליה) בשיטת המתנסים. כך אנו מבצעים את מודל הליגציה של ה-sickle והדקירה. אנו מקווים שנהניתם מהדגמה זו של ההליך ומצאתם אותה מועילה מאוד למחקריכם לפני תחילת העבודה עם בעלי חיים. אנו ממליצים בחום להשתמש במבנים ישנים או לא בני שימוש לצורך אימון, כדי לקבוע את דרגת החומרה המתאימה לניסוייכם על ידי שינוי אורך הליגציה, עובי המחט ומספר הדקירות.עם זאת, להתראות.

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מתארים שיטה כירורגית חדשנית catheterizing "לולאות מעיים" בתוך מעי של כבשה. לאחר חיות התאוששו מהניתוח ויש לי פינה אנטיביוטיקה משככי כאבים, טיפולים מרובים ניתן להפקיד ישירות לולאות באמצעות קטטר.

צנתור של לולאות מעיים של מעלי גירה

C-חותם הוא לנקז biofragmentable להגן על השקה המעי הגס מהודקים. בסרטון הזה, פרטים על הפריסה, ייצור ושימוש מוצגים.

C-חותם: מסננים Biofragmentable הגנה על השקה של המעי הגס תפוסים דליפה

קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) הוא מודל סטנדרטי ביותר עבור אלח דם בטן polymicrobial במכרסמים. מאמר זה מתאר את הליך כירורגי של CASP. המודל CASP גירסאותיה, לאפשר חקירה שיטתית של בעיות שונות לגבי הנושא של אלח דם.

קולון Ascendens סטנט דלקת הצפק (CASP) - מודל סטנדרטי עבור אלח דם בטן Polymicrobial

אלח דם ניסיוני יכול להיגרם בעכברים באמצעות קשירת cecal ולנקב שיטה (CLP). פרוטוקולים הנוכחיים להעריך autophagy in vivo בהקשר של אלח דם הנגרם CLP מוצגים כאן: פרוטוקול למדידת autophagy באמצעות עכברים (GFP)-LC3, ופרוטוקול למדידת היווצרות autophagosome על ידי מיקרוסקופית אלקטרונים.

Cecal קשירת ונקר-Induced אלח דם כמודל ללמוד Autophagy בעכברים

אנו מציגים הליך כירורגי לצנתור תא המטען של הלימפה במעי בחזירים יילודים כדי לאסוף כמויות גדולות של רכיבי חילוף חומרים של שומנים מלימפה זורמת.

צנתור לטווח ארוך של טרונק לימפה במעי וגביית הלימפה חזירים ילודים

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר מצונתר מרכזי של מחלה קריטית ממושכת. אנו משלבים את שיטת קשירת הציקל והניקוב כדי לגרום לאלח דם עם שימוש בקו ורידי מרכזי למתן נוזלים, תרופות וחומרים מזינים כדי לחקות את הסביבה הקלינית האנושית.

שימוש קו ורידים מרכזי עבור נוזלים, תרופות ומנהל מזין בתוך עכבר דגם של מחלות קשות

הגישה של חומרים מזינים, microbiota מטבוליטים ותרופות אל מחזור הדם נשלטת על ידי למכשול בטן-דם (GBB). אנו מתארים שיטה ישירה למדידת ה GBB חדירות ויוו, אשר, בניגוד נפוץ שיטות עקיפות, כמעט אינה מושפעת פונקציות כבד וכליות.

שיטת In Vivo להערכת את מחסום הדם-הבטן ואת חילוף החומרים בכבד של מוצרים Microbiota

פרוטוקול זה מתאר טכניקות למדידת תוצאות זיהומיות בבסיס החולים שנרכשו משני זיהומים במצב המדכא, הראשון על ידי הקמת לאחר הקשר/עכברים לאחר מכן מאתגרת אותם עם זיהום intranasal כדי ל ליצור מודל רלוונטי קלינית של אלח דם חיסוני.

עיצוב של הIntranasal וניקוב, מודל כפול של דיכוי חיסוני מושרה באלח דם

תפקוד מחסום אפיתל מעיים Dysregulated ותגובות חיסוניות הם סימני היכר של מחלות מעי דלקתיות שנותרו נחקרות בצורה גרועה בשל מחסור במודלים פיזיולוגיים. כאן, אנו מתארים מודל לולאת מעיים של עכברים המעסיק מקטע מעיים בעל כלי דם וחיצוניים כדי לחקור חלחיליות רירית וגיוס לויקוציטים ב- vivo.

הערכה תפקודית של חלחיליות מעיים ונדידה טרנס-אפיתלית נויטרופילית בעכברים באמצעות מודל לולאת מעיים מתוקננת

פרוטוקול זה מציג את הפרטים האופרטיביים של קשירת cecal ונקב (CLP) במודל עכבר של אלח דם. CLP היא אחת הטכניקות הנפוצות ביותר ליצירת מודל חייתי של אלח דם. לכן, נדרש פרוטוקול CLP סטנדרטי להשגת תוצאות מחקר אמינות.

הערכה של סמן ביולוגי אמין במודל של אלח דם של אלח דם של אלח דם הנגרם על-ידי נקב

למדו את מודל קשירת המעי הגס וניקורו בעכברים C57BL/6 לחקר דלקת מערכתית. שיטה זו מאפשרת לחקור תגובות חיסוניות ונזק לאיברים בזיהום פולימיקרוביאלי.

קשירת Cecal נקר נוהל

גלה סרטונים נוספים