קשירת Cecal נקר נוהל

שלום, שמי מיגל טוסקאנו מהמעבדה של ד"ר דנה במחלקה למיקרוביולוגיה והמטולוגיה באוניברסיטת טמפל. היום נראה לכם כיצד להקים את מודל ה-iCal allegation והניקור בזן העכבר C 57 Black Seas. אנו משתמשים במודל זה במעבדתנו כדי לדמות אלח דם (ספסיס) אנושי.

בעיקר, מודל זה מבוסס על נקב ברום (seum), המאפשר שחרור של חומר צואי אל החלל הפריטונאלי כדי ליצור ספסיס פולימיקרוביאלי, ובכך להגדיר תגובה חיסונית מוגברת. במודל זה, איברים רבים וסוגי תאים שונים נפגעים באופן בלתי הפיך. הדבר עשוי להוביל בסופו של דבר למותו של בעל החיים.

בואו נתחיל. הרדמת העכבר. השלב הראשון הוא הרדמת בעל החיים באמצעות הזרקה תוך-פריטוניאלית.

תערובת ביחס של אחד לאחד של Ketamine ו-xylazine. כדי למנוע נשיכות של העכבר וכדי להימנע מפגיעה בו, יש לתפוס את העכבר בזנבו ביד אחת. ביד השנייה, נלחץ את גבו כנגד הרצפה.

לאחר מכן ניתן לתפוס את העכבר בחלק האחורי של הראש ולהפנות את החיה על גבה כדי לחשוף את הבטן. באמצעות מזרק אינסולין בכיסוי (gauge) 29, מזריקים 20 עד 30 µL של חומר ההרדמה לחלל הפריטונאום. כחלק מהכנת העכבר להליך, תפסו את גב העכבר וגלחו את בטנו תוך כדי לחיצה על הזנב ו/או על רגלו של העכבר.

אנו בודקים שהעכבר אינו רגיש לכאב, ולאחר מכן מחטאים את הבטן. ראשית על ידי קרצוף עם תמיסת Betadine, ולאחריה ניגוב עם מגבון isopropyl alcohol למשך דקה אחת לפחות. ביצוע הלפרוטומיה: כדי לבצע לפרוטומיה, אנו מרים את העור במרכז הבטן בעזרת הפינצטה ומבצעים חתך קטן באורך של כסנטימטר אחד.

לאחר מכן, הרימו את הפרינאום ובצעו חתך קטן נוסף כדי לחשוף את חלל הפריטונאום. בעזרת פינצטה קמורה, החזיקו את קרום הפריטונאום. זהו וחשפו את העקום על ידי העברתו דרך קרום הפריטונאום.

מקמו אותו מעל הבטן. זהו רגע הליגציה (קישור). זהו גורם חשוב.

על מנת לקבוע את חומרתו של המודל, ניתן לווסת את חומרת הפרוצדורה. בהתאם להיקף הליגציה, העכברים יפתחו ספסיס קלה יותר. אם הליגציה תבוצע קרוב לקצה העקום (cecum), תתפתח ספסיס קלה; אם תבוצע במרכז, תתפתח ספסיס בדרגת ביניים; ואם תבוצע קרוב לשסתום המעי הדק והעקום (ileocecal valve), תתפתח ספסיס חמורה. חומרת הפרוצדורה תבוא לידי ביטוי באחוז התמותה.

לעולם אל תקשרו את השסתום האיליו-צקאלי (ileocecal valve). כעת בצעו את הקשירה באמצעות תפר משי עם קשר כפול כדי להבטיח שהיא תהיה הדוקה, ובצעו את הדקירה: החזיקו את העקום (cecum) ובצעו בזהירות דקירה קרוב לאתר הקשירה, ודקירה נוספת קרוב יותר לקצה העקום. ממברנת העקום רכה ותישבק בקלות רבה.

באמצעות שימוש במחטים בעוביים שונים וביצוע נקב אחד או שניים, ניתן גם לווסת את חומרת המודל. שיטת הנקב הבודד או הכפול המוצגת כאן היא טכניקה חלופית לנקב הרצף הקלאסי (through and through sequel puncture). היתרון בשימוש בשיטת הנקב הבודד או הכפול הוא היכולת לשלוט טוב יותר בכמות הצואה הנפרשת בעת לחיצה על ה-cecum.

החזיקו את העקום בשתי אצבעות וסחקו אותו בעדינות כדי להוציא כמות קטנה מאוד של צואה. לאחר סגירת הלפרוטומיה, הרימו את הפריטונאום והחזירו בזהירות את העקום לחלל הפריטונאום.

הקפידו מאוד להימנע מדקירה מקרית של העקום (cecum). מומלץ להשתמש בפינצטה גדולה יותר. כעת יש לסגור את חלל הפריטונאום. בעזרת תפרי משי, חשוב מאוד לוודא כי הסגירה בוצעה היטב.

נתחיל מצד אחד של הפצע שבו נבצע קשר. נמשיך בתפירה עד לצד השני על ידי העברת המשי תחת הלולאה של הדקירה הקודמת. כדי לסגור את העור, ניתן להשתמש בסגורי פצעים מסוג Mitchell או בסגורי reflex, תוך שימוש בכלי המתאים לסגירת הסגורים.

מקמו מספר אטבים ככל שנדרש כדי לוודא שהפצע סגור. בצעו החייאה לעכברים על ידי הזרקה תת-עורית של 1 mL תמיסת סלין שחוממה מראש. באמצעות מחט בכיול 25 gauge, מדד החייאה בנוזלים זה יגרום לשלב ההיפר-דינמי של אלח דם (sepsis), ובכך יסתיים ההליך.

מקם את העכבר תחת מנורת חימום אינפרה-אדומה, או לחלופין על משטח חימום, עד שהעכבר יתאושש מההרדמה. ספק מזון ומים על רצפת הכלוב והשגח על בעלי החיים בכל שמונה עד 12 שעות כדי לזהות סימני מחלה. הזרק buprenorphine באופן תת-עורי לשיכוך כאבים לאחר הניתוח.

משכך כאבים אחר שניתן להשתמש בו הוא T.Tramadol. סימנים של אלח דם ותסמינים של אלח דם הם חום, לתרגיה, פרווה זקופה, זקפה, שלשול, התקבצות (huddling) ומצב כללי רע. בעלי חיים חולים מאוד מראים ירידה חמורה בטמפרטורת הגוף ובקושי זזים כדי למנוע סבל.

בשלב זה יש להקלי them (הדליה) בשיטת המתנסים. כך אנו מבצעים את מודל הליגציה של ה-sickle והדקירה. אנו מקווים שנהניתם מהדגמה זו של ההליך ומצאתם אותה מועילה מאוד למחקריכם לפני תחילת העבודה עם בעלי חיים. אנו ממליצים בחום להשתמש במבנים ישנים או לא בני שימוש לצורך אימון, כדי לקבוע את דרגת החומרה המתאימה לניסוייכם על ידי שינוי אורך הליגציה, עובי המחט ומספר הדקירות.

עם זאת, להתראות.