קשירת Cecal נקר נוהל
May 7th, 2011
במודל עכבר של קשירת לנקב cecal ו ככלי רב ערך לחקר אלח דם האדם.
שלום, שמי מיגל טוסקנו מהמעבדה של ד"ר דינה במחלקה למיקרוביולוגיה והמולוגיה באוניברסיטת טמפל. היום אנו הולכים להראות לכם כיצד להגדיר את מודל ההאשמה והניקוב של iCal בזן C 57 Black Seas Mouse. אנו משתמשים במודל הזה במעבדה שלנו כדי לחקות אלח דם אנושי.
בעיקרון, מודל זה מורכב מניקוב של הסאום המאפשר שחרור של חומר צואתי לחלל הצפק כדי לייצר אלח דם פולימיקרוביאלי, ובכך ליצור תגובה חיסונית מחמירה. במודל זה, איברים רבים וסוגי תאים שונים ניזוקים באופן בלתי הפיך. זה בסופו של דבר יכול לגרום למותו של בעל החיים.
אז בואו נתחיל. הרדמת העכבר. השלב הראשון הוא הרדמת החיה על ידי הזרקה תוך צפקית.
תערובת, אחד לאחד של קטומין וקסילזין. כדי להימנע מנשיכה על ידי העכבר, כדי להימנע מפגיעה בו, עלינו לתפוס את העכבר מהזנב ביד אחת. ביד השנייה אנחנו לוחצים לאחור על הרצפה.
לאחר מכן אנו יכולים לתפוס את העכבר מהחלק האחורי של הראש ואז להפוך את החיה על גבו כדי לחשוף את הבטן. בעזרת מזרק אינסולין בגודל 29, אנו מזריקים 20 עד 30 מיקרוליטר של ההרדמה בחלל הצפק. הכנת העכבר להליך, תפוס את גב העכבר וגלח את בטנו על ידי לחיצה על הזנב ו/או רגל העכבר.
אנו בודקים שהעכבר אינו רגיש לכאב, ואז מחטאים את הבטן. תחילה על ידי קרצוף בתמיסת בטדין, ולאחר מכן ניגוב במגבון איזופרופיל אלכוהול למשך דקה לפחות. תרגול הלפרוטומיה כדי לתרגל לפרוטומיה, אנו מרימים את העור באמצע הבטן בעזרת המלקחיים ומבצעים חתך קטן באורך של כסנטימטר אחד.
לאחר מכן הרם את הפרינאום ותרגל חתך קטן נוסף כדי לחשוף את חלל הצפק. בעזרת מלקחיים מעוקלים, החזק את קרום הצפק. זהה וחשוף את הצקום על ידי העברתו דרך קרום הצפק.
הניחו אותו על הבטן. עכשיו זה רגע הקשירה. זהו גורם חשוב.
על מנת לקבוע את חומרת המודל, אנו יכולים לווסת את חומרת ההליך. על ידי הארכת הקשירה, עכברים יפתחו אלח דם קל יותר. אם קשירה נעשית קרוב יותר לסוף הצקום, אלח דם בדרגה בינונית אם נעשה באמצע ואלח דם חמור אם נעשה קרוב יותר למסתם האילאוצקלי, חומרת ההליך תבוא לידי ביטוי באחוז התמותה.
לעולם אל תקשור את השסתום האילאוצקלי. כעת בצע את הקשירה באמצעות תפר משי עם קשר כפול כדי להדק אותו, מה שהופך את הניקוב החזק את הצקום ובצע בזהירות ניקוב קרוב לאתר הקשירה ובצע ניקוב נוסף קרוב יותר לקצה הצקום. קרום הסקום רך והוא יחורר בקלות רבה.
באמצעות מחטים בעוביים שונים וביצוע נקב אחד או שניים, אנו יכולים גם לווסת את חומרת המודל. שיטת הפנצ'ר היחיד או הכפול המוצגת כאן היא טכניקה חלופית לניקוב ההמשך. היתרון בשימוש בשיטת הניקוב היחיד או הכפול הוא שניתן לשלוט טוב יותר בכמות הצואה שחולצה כאשר הם מחפשים אותם נלחצת.
החזק את הסקום בשתי האצבעות והוציא בעדינות את הצקום כדי לחלץ כמות קטנה מאוד של צואה. סגירת הלפרוטומיה, ואז הרם את הצפק והניח בזהירות את הצקום. בחלל הצפק.
היזהר מאוד כדי להימנע מדקירות מקריות של הצקום עם המלקחיים, מומלץ להשתמש במלקחיים גדולים יותר. זה הזמן לסגור את חלל הצפק. באמצעות תפר משי, חשוב מאוד לוודא שהוא סגור היטב.
אנו מתחילים מצד אחד של הפצע בו אנו יוצרים קשר. המשיכו להכין את התפר עד הצד השני על ידי העברת המשי מתחת ללולאה של הפנצ'ר הקודם. כדי לסגור את העור, אנו יכולים להשתמש בקליפס פצע מיטשל או בקליפס רפלקס באמצעות הכלי הנכון לסגירת הקליפים.
הניחו כמה קליפסים שצריך כדי לוודא שהפצע סגור. להחיות עכברים על ידי הזרקה תת עורית, מיליליטר אחד של תמיסת מלח טרום חמה. באמצעות מחט 25 מד, אמצעי החייאת נוזלים זה יגרום לשלב ההיפר-דינמי של אלח דם, ויסיים את ההליך.
הנח את העכבר מתחת לאור חימום אינפרא אדום, או לחילופין מעל כרית חימום עד שהעכבר יתאושש מההרדמה. ספקו מזון ומים על רצפת הכלוב והשגיחו על בעלי החיים כל שמונה עד 12 שעות לאיתור סימני מחלה. יש להזריק בופרנורפין תת עורי לשיכוך כאבים לאחר הניתוח.
משכך כאבים אחר לשימוש הוא T.Tramadol. סימני אלח דם, תסמינים של אלח דם הם חום, עייפות, פלו, זקפה, שלשולים, הצטופפות וחולשה. בעלי חיים חולים מאוד מראים ירידה חמורה בטמפרטורת הגוף והם בקושי זזים כדי להימנע מסבל.
יש להמית אותם בשלב זה H.So כך אנו מבצעים את המודל של קשירת מגל ודייקן. אני מקווה שנהניתם מההדגמה של ההליך הזה ומצאתם אותו שימושי מאוד למחקר שלכם לפני שהתחלתם את המחקר שלכם בבעלי חיים. אנו ממליצים בחום להשתמש במוחות ישנים או שאינם בשימוש לאימון על מנת לקבוע את דרגת החומרה המתאימה לניסויים שלך על ידי שינוי אורך הקשירה, עובי המחט ומספר הפנצ'רים.
עם זאת, להתראות.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה
מאמר זה דן במודל העכבר של קשירת והחדרת התוספתן, המשמש לחקר ספסיס בבני אדם. המודל מדמה ספסיס פוליימקרוביאלי על ידי החדרת חומר צואתי לחלל הצפק, מה שמוביל לתגובה חיסונית מוגזמת ונזק פוטנציאלי לאיברים.
רכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- מיקרוביולוגיה
- אימונולוגיה
- מודלי בעלי חיים
רקע
- ספסיס הוא מצב רפואי חמור הנובע מזיהום.
- מודלי בעלי חיים חיוניים להבנת המנגנונים של ספסיס.
- מודל קשירת והחדרת התוספתן מדמה ביעילות ספסיס אנושי.
- מודל זה מאפשר את המחקר של תגובות חיסוניות ונזק לאיברים.
מטרת המחקר
- להדגים את הקמת מודל קשירת והחדרת התוספתן.
- להדגיש את הרלוונטיות של מודל זה במחקר ספסיס.
- לספק תובנות לגבי התגובה החיסונית המושרית על ידי מודל זה.
שיטות ששימשו
- שימוש בעכברי C57BL/6 עבור המודל.
- החדרת חור בתוספתן כדי לשחרר חומר צואתי.
- מעקב אחר התגובה החיסונית והנזק לאיברים.
- הערכת שיעור ההישרדות של בעלי החיים לאחר ההליך.
תוצאות עיקריות
- המודל משרה בהצלחה ספסיס פוליימקרוביאלי.
- תגובה חיסונית משמעותית נצפתה בעכברים.
- נזק לאיברים צוין, מה שמוביל לתמותה פוטנציאלית.
- מודל זה מספק נתונים חשובים למחקר ספסיס.
מסקנות
- מודל קשירת והחדרת התוספתן הוא כלי חשוב לחקר ספסיס.
- הוא מאפשר לחוקרים לחקור תגובות חיסוניות וכשל איברים.
- מחקרים נוספים יכולים לשפר את ההבנה של מנגנוני הספסיס.
שאלות נפוצות
Executive Industry Relevance
The cecal ligation and puncture (CLP) model provides a reproducible, polymicrobial sepsis model that mirrors human pathophysiology, enabling target validation and mechanistic de-risking in early discovery. By reproducing both hyperdynamic and hypodynamic phases, it supports predictive confidence in therapeutic screening and translational biomarker identification. This model aids in assessing drug efficacy across disease stages, reducing late-stage failure risk in sepsis-related programs.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of immunological and physiological status across sepsis phases to validate therapeutic hypotheses.
- Operational Value: Supports functional target validation by modeling cytokine profiles and lymphocyte apoptosis relevant to human sepsis.
- Scientific Value: Facilitates pathway clarification through controlled induction of polymicrobial infection and organ damage readouts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantifiable immune response and organ dysfunction metrics for assay standardization.
- Operational Value: Provides reproducible survival and physiological readouts enabling reliable compound evaluation.
- Scientific Value: Allows modulation of sepsis severity via ligation length, puncture number, and needle thickness for dose-response screening.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Models disease-relevant immune depression and nocosomial infection risk for translational biomarker alignment.
- Operational Value: Supports preclinical continuity by replicating clinical sepsis progression from hyperdynamic to hypodynamic phases.
- Scientific Value: Enables risk-adjusted advancement decisions through measurable outcomes like body temperature drop and lethargy.
Pipeline & Workflow Integration
The CLP model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by modeling systemic inflammatory response and immunosuppression phases.
- Screening: Delivers quantitative outputs such as cytokine levels, organ injury markers, and survival rates for compound comparison.
- Analytics: Enables statistical analysis of time-to-event and physiological parameters to assess treatment effects.
- Translational Research: Connects to preclinical validation via replicated human sepsis cytokine profiles and organ failure patterns.
- Enterprise Reuse: Serves as a reusable platform for sepsis mechanism probing and therapeutic screening across multiple campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through phase-specific pathophysiological modeling.
- Operational Value: Standardization via controlled severity modulation and postoperative monitoring protocols.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions by capturing stage-dependent drug effects in sepsis.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on model reproducibility and translational fidelity.
Implementation Considerations
- Requires expertise in aseptic surgical technique and rodent anesthesia.
- Dependent on instrumentation for ligation, puncture, and postoperative monitoring.
- Necessitates cross-team standardization of severity scoring and resuscitation protocols.
- Adaptation considerations include mouse strain, sex, and baseline health status.
- Practical limitations include variability in fecal extrusion and model mortality rates.
