מיקוד ננו-חלקיקים פונקציונלי של סרטן השחלות: טכניקה להקל על ספיגת חומר ניגוד ננו-חלקיקים מצומדים בחומצה פולית על ידי תאי סרטן השחלות

קולטני חומצה פולית הם גליקופרוטאינים הקשורים לממברנה המתבטאים יתר על המידה על ידי רוב תאי סרטן השחלות. ניצול קולטנים אלה מאפשר אספקה ממוקדת של ננו-חלקיקים אבחנתיים לתאי הסרטן.

התחל בהשעיה של המצומדים הרצויים של חומר ניגוד ננו-חלקיקים מכוסה חומצה פולית. הוסף תרחיף ננו-חלקיקים זה לתרבית דבקה של תאי סרטן השחלות. דגרו את התרבות לפרק הזמן הרצוי.

החומצה הפולית המתפקדת לננו-חלקיקים מסייעת בזיהוי קולטני החומצה הפולית המתבטאים בתאי הסרטן, ומקדמת את הקישור הסלקטיבי של צימודי ננו-חלקיקים עם התאים. לאחר מכן, קרום הפלזמה פולש, מה שמקל על ספיגה והצטברות תאים של ננו-חלקיקים.

קצור את התאים הסרטניים. לאחר מכן, צנטריפוגה להפרדת התאים מהסופרנטנט המכיל ננו-חלקיקים לא קשורים. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים נושאי הננו-חלקיקים במאגר מתאים ליישומים במורד הזרם.

ראשית, ערבבו את ננו-חלקיקי הנחושת הגופרתית המצופים בחומצה פולית בריכוז המתאים באמצעי RPMI טריים. הוסף תמיסת ננו-חלקיקים זו לכל באר בצלחת המוכנה של 24 בארות המכילה תאי SKOV-3 בריכוז של 400 מיקרוגרם למיליליטר. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני למשך שעתיים.

לאחר מכן, נסה את התאים עם 0.5 מיליליטר של 0.25% טריפסין ו- EDTA. כדי לנטרל את הטריפסין, יש להוסיף לפחות 1 מיליליטר של מצע גידול מלא RPMI 1640 נטול חומצה פולית ולצנטריפוגה של התאים ב-123 x גרם למשך שש דקות. כדי לשטוף את התאים, הסר את הסופרנטנט.

השעו מחדש את התאים ב -2 מיליליטר PBS וצנטריפוגה ב -123 x גרם למשך שש דקות. חזור על שלב כביסה זה פעמיים כדי להסיר ננו-חלקיקים לא קשורים.

לאחר מכן, השעו מחדש את התאים עם 1 עד 2 מיליליטר של תמיסת טווין 2% ב-PBS. ספרו את התאים באמצעות המוציטומטר וטריפן כחול. לדלל את התאים בתמיסה של 2% טווין ו-PBS לריכוז הנבחר לזיהוי.