בידוד מיטוכונדריאלי: טכניקה לבידוד מיטוכונדריה מדגימת רקמת סרטן השחלות האנושית

המיטוכונדריה, האברונים הציטופלזמיים הידועים כתחנות הכוח של התא, עוברים שינויים מבניים ותפקודיים דרסטיים במהלך התקדמות הסרטן.

כדי לבודד מיטוכונדריה, קחו רקמה סרטנית נקייה בכלי זכוכית וטחנו אותה לחתיכות קטנות. העבירו את החלקים לצינור המכיל מאגר בידוד מיטוכונדריאלי. הומוגניזציה של הדגימה כדי לשבש את התאים ולשחרר את תוכנם, כולל האברונים.

צנטריפוגה את התערובת במהירות נמוכה. זה מגלגל את הרכיבים הצפופים יותר כמו גרעינים, פסולת רקמות וכל תא שלם, ומשאיר רכיבים פחות צפופים כמו מיטוכונדריה, מיקרוזומים, פרוקסיזומים וליזוזומים בסופרנטנט. אוספים את הסופרנטנט והצנטריפוגה במהירות גבוהה. מיקרוזומים, בהיותם קלים יחסית, נשארים בסופרנטנט, בעוד שהחלק הגולמי המכיל מיטוכונדריה מתגלגל בתחתית.

הסר את ה-supernatant והשהה מחדש את הגלולה במדיום שיפוע צפיפות מתאים. הגדר שיפוע צפיפות לא רציף על ידי שכבות השבר המיטוכונדריאלי הגולמי בתוך מדיות צפיפות שונות, וסידורם בסדר יורד של צפיפות מלמטה למעלה. צנטריפוגה במהירות גבוהה מאוד. אברונים נפרדים בתוך הצינור כדי לאמץ עמדת שיווי משקל על סמך הצפיפות היחסית שלהם. אסוף את השבר המיטוכונדריאלי שנוצר בממשק בין אמצעי הצפיפות, המכיל פרוקסיזומים וליזוזומים.

כדי להתחיל בהליך זה, הכינו 250 מיליליטר של מאגר הבידוד המיטוכונדריאלי כמתואר בפרוטוקול הטקסט. מניחים כ -1.5 גרם רקמות סרטן