אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:17 דק׳ • April 30th, 2023
טכניקת פיזור רמאן תהודה משופרת על פני השטח או SERRS משתמשת במולקולות אנליטיות הנושאות צבע מדווח ראמאן כדי לקיים אינטראקציה עם אור מקרי ולגרום לפיזור אור לא אלסטי.
התחל עם תערובת הזרקה המכילה שני סוגים של ננו-בדיקות - ננו-בדיקות ממוקדות המתויגות עם נוגדנים ספציפיים נגד קולטנים הנושאים צבע מדווח מובהק וננו-בדיקות בקרה לא ממוקדות בעלות צבע מדווח שונה. הזריק תרחיף זה לחלל הצפק של עכברה הנושאת סרטן שחלות גרורתי. אפשר מספיק זמן לננו-בדיקות להתפזר בתוך חלל הצפק.
הננו-בדיקות הממוקדות נגד הקולטנים נקשרים לקולטנים הספציפיים שלהם המתבטאים יתר על המידה בתאי סרטן השחלות, בעוד שהננו-בדיקות הלא ממוקדות נצמדות באופן לא ספציפי למשטח הקרביים.
המתת חסד של העכבר ואבטח אותו על פלטפורמת הדמיה במצב שכיבה. חתך בניתוח את בטנו והסר את המעיים כדי לחשוף את חלל הצפק. דמיין את העכבר מתחת למיקרוספקטרופוטומטר ראמאן.
בהקרנה באור לייזר, שני סוגי הננו-בדיקות גורמים לאור הפוגע להתפזר בצורה שונה, וכל אחד מהם יוצר חתימות ספקטרליות ייחודיות. עבד את הספקטרום כדי לקבוע את השפע היחסי של ננו-בדיקות כדי להבדיל את תאי הסרטן מהרקע הקרביים.
להזרקת ננו-בדיקות, סובב את שני טעמי הננו-בדיקה והשהה מחדש את הכדורים במאגר MES טרי בריכוז של 600 פיקומולר. מערבבים את הננו-חלקיקים וטוענים 1 מיליליטר מהתמיסה המתקבלת למזרק אחד של 1 מיליליטר המצויד במחט 26 מד לכל עכבר ומזריקים תוך צפקית את כל הנפח לבטן של כל עכבר. לאחר מכן, עסו בעדינות את הבטן כדי לפזר את הננו-חלקיקים בכל חלל הצפק.
לאחר 25 דקות לפחות, אבטח את הגפיים של בעל חיים שהוזרק בהמתת חסד על משטח כירורגי והשתמש במלקחיים משוננים ובמספריים לדיסקציה כדי להסיר את העור כדי לחשוף את הצפק. חותכים את הצפק. חבר את דשי הצפק לפלטפורמה ושטוף את פנים חלל הצפק עם לפחות 60 מיליליטר PBS. לאחר מכן, העבירו את הפלטפורמה למיקרוספקטרופוטומטר ראמאן עם תצורה אופטית זקופה בשלב ממונע ודמו את הבטן תחת פרמטרי ההדמיה המתאימים.
זה חיוני שמישור המוקד של סריקת ראמאן יהיה על פני השטח של רוב הקרביים. אם האיברים אינם במישור, האות הנרכש לא יהיה שימושי.