אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:17 דק׳ • April 30th, 2023
באיתות פרקריני, תאים מייצרים ומפרישים מולקולות איתות הגורמות לתגובות בתאים שכנים. כדי לחקות איתות פרקריני, התחל בהכנת תרחיפים חד-תאיים של תאי סרטן השחלות ותאי מזותל במדיום המתאים להם.
לאחר מכן, קח תוספת קרומית נקבובית הפוכה בצלחת תרבית סטרילית. השליכו את תרחיף התאים הסרטניים על המשטח התחתון של קרום ההכנסה ליצירת כיפה נוזלית. דגירה כדי לאפשר לתאים להתיישב ולהיצמד לממברנה.
הפוך את התוספת כדי לנקז את המדיה. העבירו את התוספת לתבנית תרבית טרייה המכילה אמצעי גידול כדי להזין את תאי הסרטן המודבקים למשטח התחתון של הממברנה. כעת, הוסף את תרחיף תאי המזותל לבאר התוספת. דגירה כדי לאפשר לתאים להיצמד לצד הנגדי של הממברנה, ולהכחיש כל מגע ישיר בין שני סוגי התאים.
במהלך התרבית, שני סוגי התאים מפרישים גורמי איתות. מולקולות אלה מתפזרות דרך הממברנה הנקבובית לעבר התאים השכנים. הם נקשרים לקולטני תאים ספציפיים וגורמים למפלי איתות מורכבים בשני סוגי התאים.
התחל בניתוק תאי סרטן השחלות מתערובת משולבת של 80% עם 1 מיליליטר של 0.25% טריפסין למשך 40 עד 60 שניות, ולאחר מכן נטרול התגובה עם 6 מיליליטר של מצע גידול מלא. אוספים את התאים על ידי צנטריפוגה ומשרים את הגלולה ב -5 מיליליטר של מצע גידול שלם טרי.
לאחר הספירה, יש לדלל את התאים ל-100,000 תאי סרטן שחלות למיליליטר של ריכוז מדיום גידול מלא, ולהניח שלוש תוספות תרבית
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים