מידול גרורות סרטן השחלות ברירית חלל הצפק: שיטה להקמת מודל תלת ממדי במבחנה של רירית הצפק

הצפק, או הממברנה המצפה את חלל הבטן, מהווה תאי מזותל צפקי הנתמכים על שכבה של רקמת חיבור פיברווסקולרית. תאי סרטן שחלות גרורתיים נצמדים לרירית הצפק הזו ומתרבים לגידולים סרטניים.

כדי לדגמן גרורות של סרטן השחלות, התחל בלקיחת פיברובלסטים אנושיים בצינור חרוטי וערבב אותם עם קולגן - חלבון מטריצה חוץ-תאית. צלחת את המתלה על צלחת תרבות. דגירה כדי להקל על התמצקות מטריצת הקולגן כדי להטמיע את הפיברובלסטים ולחקות את רקמת החיבור של הצפק.

לאחר מכן, הוסף תרחיף של תאי מזותל מעל שכבת הפיברובלסטים-קולגן. דגרו את הצלחת כדי לאפשר לתאי המזותל להיצמד וליצור שכבה אחת על פני שכבת הפיברובלסטים-קולגן. תרבות אורגנוטיפית תלת מימדית זו מחקה כעת את הקומפוזיציה והארכיטקטורה של בטנה צפקית in vivo.

לבסוף, זרעו את התרבית האורגנוטיפית הזו עם תאי סרטן השחלות ודגרו למשך הזמן הרצוי. תאי סרטן השחלות משחררים מולקולות איתות מסוימות המשנות את שכבת המזותל, משפרות את ההידבקות והפלישה של תאי הסרטן, ומחקות מצבים גרורתיים in vivo.

כדי לשחרר את הפיברובלסטים הרגילים של אומנטום מהתרבית, יש לשטוף את בקבוק התרבות עם 10 מיליליטר PBS ואחריו 3 מיליליטר טריפסין למשך לא יותר מחמש דקות. כאשר התאים התנתקו, נטרלו את הטריפסין בנפח של לפחות פי שלושה ממצע הגידול המלא והעבירו את התאים לצינור חרוטי של 50 מיליליטר. סובב את התאים והשהה מחדש את הגלולה ב -5 מיליליטר של מדיום גידול מלא. לאחר מכן, ספרו את התאים ודללו אותם ל-2 עד 4 פעמים 10 לפיברובלסטים השלישיים לכל 100 מיקרוליטר של ריכוז מדיום גידול מלא.

לאחר מכן, הוסיפו לתאים 0.5 מיקרוגרם לכל 100 מיקרוליטר של קולגן זנב עכברוש I וצלחו 100 מיקרוליטר תאים לבאר לצלחת תחתונה שחורה ושקופה של 96 בארות. לאחר מכן, העבירו את הצלחת לאינקובטור תרבית תאים למשך 4 שעות לפחות או עד שהתאים נדבקים למשטח הצלחת. בזמן שהפיברובלסטים הרגילים של האומנטום מתייצבים, נתק את ה-HPMC מצלוחיות התרבית שלהם ודלל את התאים הללו ל-1 עד 2 פעמים 10 ל-HPMC הרביעי לכל 50 מיקרוליטר של מצע גידול מלא.

לאחר מכן, הוסף 50 מיקרוליטר של HPMC לכל באר לפיברובלסטים הרגילים המחוברים והחזר את הצלחת לחממת תרבית התאים למשך 18 שעות לפחות לפני השימוש הניסיוני. למחרת, זרעו את התרביות האורגנוטיפיות התלת-ממדיות עם GFP המבטאות תאי סרטן שחלות מתרבית משולבת של 80% עד 90% בדילול המתאים לבדיקה הרצויה במורד הזרם.