אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:18 דק׳ • April 30th, 2023
האומנטום, רקמה עשירה בשומן בתוך חלל הצפק, מורכב ממאגרי שומן המספקים מיקרו-סביבה מתאימה לתאי סרטן גרורתיים להתיישב וליצור גידולים משניים. כדי לחקור קולוניזציה זו ex vivo, התחל במיקום תרבית תאים קרומית חדירה בתוך צלחת תרבית.
מרחו דבק רקמות על האזור הפנימי של קרום התוספת. הניחו צמח עכבר על הדבק כדי לשתק את הרקמה. זרעו בעדינות תרחיף של תאי סרטן השחלות המסומנים בפלואורסצנט על גבי האומנטום.
לאחר מכן, מלאו את דפנות הבאר במדיום מתאים להשלמת צמיחת התאים ודגרו למשך הזמן הרצוי. רקמת האומנטל מכילה מבנים מיוחדים הנקראים כתמים חלביים, שהם אשכולות של תאים חיסוניים ארוזים סביב רשתות של כלי דם. תאי חיסון אלה מפרישים גורמים כימיים מסוימים המושכים תאים סרטניים ומקדמים את השתלתם. תאי הסרטן המתיישבים מתרבים, ומדמים מצבים גרורתיים.
לבסוף, השליכו את המדיה המבוזבזת. התבונן בתרבית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי להעריך מושבות תאי סרטן פלואורסצנטיים בתוך הרקמה האומנטלית.
לגדל ולהכין תאים מתויגים פלואורסצנטיים ולהשעות מחדש בריכוז של 2 מיליון תאים למיליליטר. מרחו כ -6 מיקרוליטר של דבק הרקמות על הממברנה של תוספת התרבית והניחו לו להתייבש באוויר. לאחר מכן, שטפו את הממברנה פעמיים במים סטריליים כדי להסיר דבק עודף לפני ייבוש הממברנות באוויר מתחת למכסה המנוע הלמינר.
כורתים בזהירות את האומנטה ומחברים אותה לקרום המצופה דבק באמצעות מלקחיים סטריליים. לאחר שאפשרתם לרקמה להיצמד לקרום למשך דקה אחת, הוסיפו 500 מיקרוליטר של תרחיף התאים על גבי כל אומנטום בכל תוספת תרבית.
לאחר מכן, מלאו את האזור סביב תא הטרנסוול ב-2.5 מיליליטר של מדיה DME/F-12. דגרו את האומנטה עם תרחיף תאים למשך שש שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בסביבה של 5% CO2. הסר בזהירות ושטוף את האומנטה עם כ -10 מיליליטר PBS. לבסוף, דמיין מוקדי תאים סרטניים פלואורסצנטיים באמצעות מערכת הדמיה פלואורסצנטית מתאימה.