בדיקת פינוי מזותל: טכניקה במבחנה לכימות יכולת הפלישה של ספרואידים של סרטן השחלות לחד-שכבות של תאי מזותל

במהלך גרורות של סרטן השחלות, תאים ממאירים מתנתקים מאתר הגידול הראשוני ומתחילים להסתובב בתוך חלל הצפק. תאים אלה יכולים ליצור אשכולות או ספרואידים הנצמדים לתא המזותליאלי חד-שכבתי המצפה את חלל הצפק. ככל שהגידול גדל, הוא מנקה את תאי המזותל הבסיסיים כדי להקל על הפלישה.

כדי לדגמן פינוי מזותל, התחל בזריעת תאים מזותליים המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק או GFP לצלחת תרבית עם תחתית זכוכית מצופה פיברונקטין. ציפוי הפיברונקטין מספק מטריצה המקדמת הצמדת תאים. דגרו את המנה כדי לאפשר לתאי מזותל להתפשט וליצור שכבה חד-שכבתית.

לאחר מכן, העבירו תרחיף של ספרואידים של תאי סרטן השחלות המבטאים חלבון פלואורסצנטי אדום אל החד-שכבה המזותלית. דמיין את התרבית למשך זמן ממושך באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי דולג זמן. הספרואידים האדומים-פלואורסצנטיים ישקעו וייצמדו לחד-שכבת המזותל הירוקה-פלואורסצנטית.

תאי הסרטן מפעילים כוח על תאי המזותל, משבשים את צמתי התאים ומשנים את שלמות שכבת המזותל. הכוח גם עוקר את תאי המזותל הבסיסיים, ויוצר חור. בחרו קביעת מסנן GFP מתאימה כדי להציג את החור שנוצר כשטח שחור בתמונה. מדוד את החלל כדי לכמת את מידת המרווח המזותלי.

כדי להתחיל בהליך זה, יש לצפות מראש את הבארות של צלחת MatTek עם תחתית זכוכית עם 6 בארות עם פיברונקטין. מוסיפים 2 מיליליטר תמיסת פיברונקטין / PBS לכל באר של המנה ודוגרים בטמפרטור