חלון ביצים: שיטה לפתיחת קליפת ביצי תרנגולת מופרית לחשיפת כלי הדם של הממברנה הכוריאואלנטואית

בביצת עוף מופרית, הממברנה הכוריו-אלנטואית או CAM היא שכבה בעלת כלי דם גבוהים הממוקמת מתחת לקרום קליפת הביצה הפנימית. הוא מתפקד כדי לתמוך בהתפתחות העובר.

כדי לחשוף CAM מפותח במלואו, התחל בהנחת נר ביצה - מקור אור בהיר - על קליפת הביצה כדי לדמיין את פנים הביצה. אתר את תא האוויר בין ממברנות קליפת הביצה החיצוניות והפנימיות לבין כלי דם מסועפים בולטים בתוך הביצה. סמן את מיקומם חיצונית.

בנקודות אלה, צרו חורים עגולים קטנים בקליפת הביצה כדי לחשוף את קרום הקליפה הלבנה שמתחתיו. חודרים בעדינות את הממברנה החשופה בשני המקומות מבלי לשבש את ה-CAM או לגרום לאלבומין או לדליפת דם.

שמירה על הביצה לאורך, הפעל יניקה על פתח תא האוויר הטבעי כדי להוציא אוויר מבפנים. הלחץ השלילי שנוצר מוריד את ה-CAM מתחת לצמצם השני, ויוצר תא אוויר מלאכותי מעל רשת כלי הדם.

מתאר את תא האוויר שהועבר. חותכים את קליפת הביצה, כמה סנטימטרים פנימיים לקווי המתאר, מבלי לשבש את גבול תא האוויר-CAM. הסר את הקליפה החתוכה כדי ליצור חלון גדול, וחשוף את ה-CAM וכלי הדם הבסיסיים. השתמש בסרט שקוף כדי לאטום את החלון על ביצים קיימות.

ביום ההתפתחותי 7 או 8, כאשר ה-CAM התפתח במלואו, כבו את מסובב הביצים והניחו כ-1 עד 3 ביצים לתוך מתלה הביצים בארון הבטיחות הביולוגית. כשהאורות כבויים, הנח נר ביצה על קליפת הביצה כדי לזהות ולסמן את מיקום תא האוויר של ביצה אחת. לאחר מכן, העבירו את נר הביצה מעל הקליפה כדי למצוא רשת כלי דם גדולה, וסובבו את הביצה לפי הצורך.

כלי דם אידיאליים יסתעפו בסמוך לאמצע הביצה. השתמש בטוש כדי לעקוב אחר כלי הדם שישמשו להשתלה. לאחר הדלקת האור במכסה המנוע, השתמש בכלי סיבובי אלחוטי המצויד באבן שחיקה מסיליקון קרביד כדי לקדוח חור קטן במעטפת ישירות מעל מרכז תא האוויר. לאחר שרוב הקליפה הוסרה, אך עם קרום פנימי לבן שלם, קדחו חור קטן נוסף שבו ייפתח חלון כלי הדם כפי שהודגם זה עתה. כאשר החור השני מוכן, השתמש במחט בגודל 18 כדי לנקב בעדינות את הממברנה הפנימית הלבנה מעל תא האוויר וכלי הדם, תוך הקפדה על כך שהקרום הפנימי הלבן, אך לא ה-CAM, יופרע בכל האזור הקדוח.

כאשר אור מכסה המנוע כבוי שוב, השתמש בנר הביצה כדי לוודא שתא האוויר הועבר מקצה הביצה לאזור שמעל כלי הדם. במידת הצורך, הנח צינורות ואקום המוכנסים לבקר פיפטה סביב החור מעל תא האוויר המקורי והפעל בעדינות יניקה בהתפרצויות קצרות כדי להזיז את תא האוויר. סמן את קווי המתאר של המיקום החדש של תא האוויר, כ-0.5 סנטימטרים בתוך גבול ה-air-CAM, וקבע פיסת סרט אריזה גדולה מספיק כדי לכסות את החור מעל תא האוויר החדש.

לאחר הכנת שתי הביצים האחרות כפי שהודגם זה עתה, החזירו את הביצים לאינקובטור ופתחו ביצים נוספות לניסוי בקבוצות של 1 עד 3 כפי שהודגם. לאחר פתיחת כל הביצים, העבירו 1 עד 3 ביצים עם תאי אוויר שהועברו למתלה הביצים בארון הבטיחות הביולוגית, והשתמשו בכלי סיבובי אלחוטי המצויד בגלגל חיתוך עגול כדי לחתוך קו קטן מעל גבול תא האוויר לחלוטין דרך התא מבלי לשבש את ה-CAM או כלי הדם. בעזרת מספריים מעוקלים, חותכים סביב תא האוויר הנותר כדי ליצור חלון בקליפה ולוודא את כדאיות העובר.

עוברים ברי קיימא יציגו כלי דם נרחבים, חלבון ברור, תנועת עובר ו/או פעימות לב גלויות. בעוברים שאינם ברי קיימא, ה-CAM עשוי להיראות אטום עם מעט כלי דם, אם בכלל, והעוברים עשויים להיות קטנים או נעדרים ללא תנועה או פעימת לב. בעזרת מלקחיים של Semken, משוך חתיכות כותנה קטנות מכדור צמר גפן סטרילי ומחק בעדינות את פני ה-CAM של העוברים ברי הקיימא כדי להסיר אבק ופסולת קליפה. לאחר מכן, מכסים את פתח הקליפה ברבע חתיכה של רוטב סרט שקוף בגודל 6 על 7 ס"מ מבלי לגעת ב-CAM, ומחזירים את הביצים לחממה כשהחלון הפתוח פונה כלפי מעלה. השתמש בחתיכת מתלה ביצים, בקצה מסובב הביצים או בפריט מתאים אחר כדי לתמוך בביצים שממשיכות להתגלגל.