אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:26 דק׳ • April 30th, 2023
הממברנה הכוריואלנטואית של התרנגולות, או CAM, היא קרום בעל כלי דם גבוהים שנמצא בביצים של בעלי חוליות מסוימים כמו תרנגולות. קרום חוץ-עוברי זה מצפה קרום קליפה שאינו וסקולרי ומתפקד כאתר חילופי חמצן גזי ופחמן דו חמצני בין העובר לסביבה.
כדי ליצור מודל סרטן CAM, התחל עם ביצת תרנגולת מופרית בת קיימא הנושאת CAM מפותח לחלוטין עם קליפה פתוחה חלקית החושפת את כלי הדם המסועפים שלה. ודא שה-CAM מנותק מקרום המעטפת.
הנח טבעת נון-סטיק סטרילית על נקודת ענף של כלי דם. בעזרת מוט זכוכית, שפשפו בעדינות את הממברנה בתוך הטבעת כדי לגרד את שכבת האפיתל החיצונית שלה ולחשוף את השכבה המזודרמלית הבסיסית הנושאת את כלי הדם. הכניסו תרחיף צונן של תאים סרטניים מעורבב עם מטריצה חוץ-תאית מתאימה לתוך הטבעת. הטבעת מגבילה את פיזור התאים.
אפשר למטריצה להתמצק כדי לאבטח את התאים שבתוכה. אוטמים את פתח קליפת הביצה ודוגרים על הביצה בתנאים מתאימים. כלי הדם הצפופים בתוך השכבה המזודרמלית מספקים חמצן וחומרים מזינים חיוניים לתאי הסרטן, ובכך מספקים מיקרו-סביבה מתאימה לצמיחתם והתרחבותם.
כדי להכין תרחיף תאים סרטניים להשתלה, קצרו את התאים מתרבית התאים הסרטניים המעניינת ושקעו את התאים על ידי צנטריפוגה. שאפו את הסופרנטנט והשעו מכנית את התאים בתווך השיורי. הניחו את תרחיף התאים על קרח והשתמשו בפיפטה כדי למדוד את נפח התאים במדיום. לאחר מכן, השעו מחדש את התאים בריכוז של 1 עד 2 מיליון תאים ב-20 עד 100 מיקרוליטר של מדיום, בתוספת 2.7 עד 4 מיליגרם למטריצה חוץ-תאית של מיליליטר וכל גורמי גדילה או תוספים אחרים מעניינים.
להשתלת תאים סרטניים, באמצעות טבעת טפלון, הניחו עד 6 ביציות להשתלה על מתלה הביצים וגלגלו את שולי חבישת הסרט השקוף לכיוון החלון הפתוח כדי להסיר את הסרט מהקליפות. בדוק אם הביצים ברות קיימא ובריאות. לביצים אידיאליות יהיה כלי גדול עם כלי מסתעף קטן יותר במרכז האזור הפתוח.
בעזרת מלקחיים מעוקלים, הנח טבעת נון-סטיק סטרילית על ה-CAM מעל הכלי, באופן אידיאלי מעל נקודת הסתעפות. השתמש במוט ערבוב מזכוכית סטרילית כדי לשחוק בעדינות את ה-CAM ולהחדיר את תרחיף התאים הסרטניים למרכז הטבעת. לאחר שכל התאים נמסרו, אטמו את הפתח ברבע חתיכה של סרט שקוף בגודל 6 על 7 ס"מ וסמנו את הביצית עם ייעוד שתל מתאים. לאחר מכן, הניחו את הביצה היטב בחממה, כשפתח הקליפה פונה זקוף.