מודל סרטן מבוסס קרום עוף Chorioallantoic: מודל In Ovo לחקר גידולים וגרורות של תאים סרטניים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:26 דק׳ • April 30th, 2023
הממברנה הכוריואלנטואית של התרנגולות, או CAM, היא קרום בעל כלי דם גבוהים שנמצא בביצים של בעלי חוליות מסוימים כמו תרנגולות. קרום חוץ-עוברי זה מצפה קרום קליפה שאינו וסקולרי ומתפקד כאתר חילופי חמצן גזי ופחמן דו חמצני בין העובר לסביבה.
כדי ליצור מודל סרטן CAM, התחל עם ביצת תרנגולת מופרית בת קיימא הנושאת CAM מפותח לחלוטין עם קליפה פתוחה חלקית החושפת את כלי הדם המסועפים שלה. ודא שה-CAM מנותק מקרום המעטפת.
הנח טבעת נון-סטיק סטרילית על נקודת ענף של כלי דם. בעזרת מוט זכוכית, שפשפו בעדינות את הממברנה בתוך הטבעת כדי לגרד את שכבת האפיתל החיצונית שלה ולחשוף את השכבה המזודרמלית הבסיסית הנושאת את כלי הדם. הכניסו תרחיף צונן של תאים סרטניים מעורבב עם מטריצה חוץ-תאית מתאימה לתוך הטבעת. הטבעת מגבילה את פיזור התאים.
אפשר למטריצה להתמצק כדי לאבטח את התאים שבתוכה. אוטמים את פתח קליפת הביצה ודוגרים על הביצה בתנאים מתאימים. כלי הדם הצפופים בתוך השכבה המזודרמלית מספקים חמצן וחומרים מזינים חיוניים לתאי הסרטן, ובכך מספקים מיקרו-סביבה מתאימה לצמיחתם והתרחבותם.
כדי להכין תרחיף תאים סרטניים להשתלה, קצרו את התאים מתרבית התאים הסרטניים המעניינת ושקעו את התאים על ידי צנטריפוגה. שאפו את הסופרנטנט והשעו מכנית את התאים בתווך השיורי. הניחו את תרחיף התאים על קרח והשתמשו בפיפטה כדי למדוד את נפח התאים במדיום. לאחר מכן, הש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים