אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:55 דק׳ • April 30th, 2023
תרביות אורגנואידים תלת מימדיות של תאים סרטניים מסכמות מאפיינים פתופיזיולוגיים רבים של סרטן אנושי. לפיכך, תרביות מבחנה אלה מהוות מודל מצוין לחקר הסרטן.
לעיבוד אורגנואידים אלה, התחל בתרבית של אורגנואידים תלת מימדיים שנוצרו מראש הגדלים במטריצת קרום מרתף מתאימה. הוסף מדיום התאוששות תאים רצוי ודגירה. המדיום מקל על הדה-פולימריזציה של ג'ל המטריקס, ומשחרר את האורגנואידים התלת-ממדיים לתמיסה.
צנטריפוגה את התערובת הזו כדי לגלול את האורגנואידים. אמצעי השחזור שמכיל את רכיבי המטריצה נשאר בסופרנטנט. השליכו את הסופרנטנט. לאחר מכן, הוסף תמיסת פרפורמלדהיד לכדור האורגנואיד. הכימיקל נכנס לתאי האורגנואידים ונקשר לחומצות האמינו, וגורם לקישור צולב של חלבון ולקיבוע דגימה. שלב זה חיוני לכל יישום היסטולוגי במורד הזרם.
גלולה את האורגנואידים כדי להפריד ולהסיר את הסופרנטנט המכיל פרפורמלדהיד. הוסף אגרוז מומס חם לאורגנואידים. השתמש במחט כדי לנתק ולפזר את האורגנואידים הגלולים לתוך האגרוז הנוזלי. אפשר לאגרוז להתמצק ולהטמיע את האורגנואידים. השתמש בתקע האגרוז המכיל אורגנואידים לבדיקות היסטולוגיות במורד הזרם.
כדי לעבד את האורגנואידים להיסטולוגיה, הסר את המדיה הקיימת מהבאר תוך הקפדה לא לשאוב את כיפות קרום המרתף. הוסף נפח שווה של תמיסת התאוששות תאים ודגר את הצלחת למשך 60 דקות בחום של 4 מעלות צלזיוס.
לאחר הדגירה, עקרו א
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים