בדיקת אורגנואיד ערמונית: טכניקת תרבית Ex Vivo מבוססת טבעת ג'ל מטריקס לחקר יכולת ההתמיינות של תאי אפיתל הערמונית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:16 דק׳ • April 30th, 2023
אפיתל הערמונית מורכב בעיקר מתאי אפיתל בסיסיים ולומינליים. שכבה חד-שכבתית של תאי בסיס יוצרת את הציפוי החיצוני של הבלוטה ותומכת בהישרדות תאי הלומינל. לעומת זאת, תאי הלומינל מרפדים את הלומן ומפרישים חלבונים ספציפיים לערמונית.
כדי לחקור התמיינות אפיתל של הערמונית ex vivo, התחל בהשעיה של תאי אפיתל הערמונית הבסיסיים. מערבבים את המתלה עם מטריצת קרום מרתף צוננת ביחס הרצוי. פיפטו את התערובת הזו ליד בסיס הדופן הפנימית של צלחת תרבית דוחה תאים. מערבבים את הצלחת ליצירת טבעת לאורך היקף הבאר.
דגרו את הצלחת כדי לאפשר למטריצה להתמצק. השלימו את התרבות עם מדיה מועדפת. גורמי הגדילה במדיה תומכים בהתפשטות תאי אפיתל בסיסיים. במקביל, האופי דוחה התאים של צלחת התרבית מונע כל היצמדות לתאים, ומעודד את התאים ליצור ספרואידים תלת מימדיים בתוך המטריצה.
עם הזמן, הספרואידים מפתחים לומן הגובל באפיתל רב שכבתי. תאי האפיתל הבסיסיים של רירית הלומן מתמיינים בסופו של דבר ויוצרים תאי לומינל מפרישים, מה שמוליד מבנים בלוטיים תלת מימדיים.
התחל הליך זה בהכנת תאי אפיתל בסיסיים ולומינליים של עכבר כמתואר בפרוטוקול הטקסט. שטפו את גלולת התא ב-500 מיקרוליטר של מדיה אורגנואידית של עכבר. לאחר מכן, השעו מחדש את הגלולה בצפיפות תאים של 1,000 תאים למיקרוליטר. להכנת תערובות מאסטר, ערבבו תאי אפיתל תלויים במדיה אורגנואידית של עכבר עם ג'ל מטר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים