אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:08 דק׳ • April 30th, 2023
ליזאט תאים, או הנוזל המכיל תכולת תאים ליזים, מוצא יישום בתהליכים במורד הזרם כמו מיצוי חלבונים וניתוחים. חקר השברים האלה חושף מידע על המאפיינים והתפקודים של התאים.
להכנת ליזטים של חלבון אורגנואיד, התחל בתרבית של אורגנואידים הגדלים במטריצת קרום בסיס רצויה. הסר את מדיה התרבות המושקעת מהצלחת. הוסף מדיה חמה המכילה פרוטאזות מעל המטריצה. פיפט שוב ושוב כדי לעקור את המטריצה מהצלחת.
דגרו את התערובת. האנזימים הפרוטאוליטיים במדיה מפרקים את המטריצה ומשחררים את האורגנואידים לתמיסה. צנטריפוגה את הדגימה כדי להפריד אורגנואידים מהסופרנטנט המכיל אנזים.
השעו מחדש את גלולת האורגנואיד במאגר ליזה חלבוני מתאים. דגירה של הדגימה. חומרי הניקוי במאגר משבשים את קרומי התאים של האורגנואידים, ומשחררים תוכן תוך-תאי לתמיסה. במקביל, מעכבי החלבון במאגר משביתים כל אנזימי פרוטאז ופוספטאז ששוחררו, ומונעים פירוק של חלבוני הסובסטרט שלהם.
יתר על כן, סוניקציה של התערובת כדי לשבש את התאים לחלוטין. המעטפת הגרעינית נקרעת ומשחררת חלבונים גרעיניים לתמיסה. הגלים הקוליים גם גוזזים את חומצות הגרעין המשתחררות, ומונעים מהן לזהם את החלבון ליזאט.
כדי לאסוף אורגנואידים, פוצצו שוב ושוב את ג'ל המטריצה על ידי פיפטינג של 1 מיליליטר של מדיה המכילה דיספאז מחוממת מראש ישירות על טבעת ג'ל המטריצה עד שהטבעת כולה נעקרת. העבירו את תערובת האורגנואיד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים