אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:27 דק׳ • April 30th, 2023
אורגנואידים של הערמונית מהווים בעיקר שכבה חיצונית של תאי אפיתל בסיסיים ושכבות פנימיות של תאי אפיתל לומינליים המסודרים סביב לומן מרכזי.
הדמיה שלמה מאפשרת מחקר של אורגנואידים תלת מימדיים שלמים תוך שמירה על המורפולוגיה וההטרוגניות שלהם. כדי להתחיל לצבוע, יש לטפל באורגנואידים עם קיבוע מתאים כדי לנעול את רכיביהם התאיים במקומם, ובכך לשמר אותם. שטפו את הדגימה כדי להסיר עודפי קיבוע.
דגירה עם קוקטייל של תמיסת חסימה וצבע מכתים DNA. חלבונים בתמיסה החוסמת נקשרים באופן פסיבי לאתרים לא ספציפיים של התאים ומפחיתים כל צביעת רקע. במקביל, הצבע הצבוע ב-DNA מכתים את גרעיני התאים.
הוסף שתי קבוצות של נוגדנים ראשוניים המכוונים לאנטיגנים ספציפיים המתבטאים על ידי שתי אוכלוסיות התאים המרכיבות. דגירה עם שני נוגדנים משניים שונים מצומדים בצבע פלואורסצנטי הנקשרים לנוגדנים הראשוניים. שטפו את הדגימה כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
טבלו את האורגנואידים המוכתמים ברצף בריכוזים הולכים וגדלים של תמיסות סוכר המכילות פעילי שטח כדי לשפר את שקיפות הרקמות מבלי לפגוע בארכיטקטורת האורגנואידים. טיפול זה משפר את עומק ההדמיה של הדגימה.
הרכיבו את האורגנואידים על מגלשת מיקרוסקופ הנושאת מרווחים כדי לשמר את המורפולוגיה התלת-ממדית שלהם בזמן ההדמיה. השתמש במיקרוסקופ קונפוקלי כדי לצפות בפליטות הקרינה מאוכלוסיות התאים הבסיסיות והלומינליות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים