JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:10 דק' • April 30th, 2023
דגימה של תא בודד מאפשרת לבודד תא חי בודד מתרחיף של תאים סרטניים לצורך ניתוח במורד הזרם.
התחל את הבידוד עם תרחיף תאים סרטניים. העבירו את הנפח הרצוי של מתלה זה על שקופית זכוכית. השאירו את המגלשה ללא הפרעה לזמן מה כדי להפחית את תנועת החלקיקים ולאפשר לתאים להתייצב.
כעת, העבירו את השקופית מתחת למיקרוסקופ המצויד במיקרומניפולטור המחובר לקצה מיקרו-נימי. מכשיר דיוק גבוה זה מאפשר אינטראקציה פיזית עם תאים בדגימה ברמה מיקרוסקופית.
כוונו את הקצה המיקרו-נימי קרוב לתא מטרה יחיד. על ידי הפעלת יניקה, אסוף את תא המטרה לתוך המיקרו-נימי. כעת, העבירו את המיקרו-נימי ישירות לתוך צינור המכיל את מאגר האיסוף הרצוי.
הוצא את התוכן המיקרו-נימי כדי לשחרר את התא הבודד שנלכד לתוך המאגר. אחסן את התא הבודד החי המבודד על קרח עד לניתוח נוסף.
לצורך מיקרומניפולציה, העבירו את כל 100 המיקרוליטרים של מתלה התאים על שקופית זכוכית. לאחר מכן, הנח את שקופית הזכוכית על מיקרוסקופ המצויד במיקרומניפולטור ואפשר לתאים להתיישב למשך 5 דקות. לאחר מכן, בצינורות PCR של 0.2 מיליליטר, פיפט 2 מיקרוליטר של ליזיס תאים מערבבים ומעבירים על קרח. השתמש במיקרומניפולטור כדי לאסוף תא בודד במיקרוליטר אחד של מי מלח 1X חוצץ פוספט.
לאחר מכן, העבירו את התא ישירות ל-2 מיקרוליטר של תערובת מאסטר ליזה של תאים. השתמש במיקרופוגה שולחנית כדי לסובב במהירות את הדגימות ב-2000 x גרם למשך 3 שניות כדי לאסוף את הנוזל בתחתית הצינור.
מאמר זה מדגים טכניקה מדויקת לבידוד תאים בודדים מתליה תאים הטרוגנית, המאפשרת ניתוח של תאים בודדים בשלבים הבאים. הפרוטוקול משתמש במניפולטור מיקרוסקופי ובמערכת של קפילרות מיקרוסקופיות כדי לבחור ולהעביר פיזית תאי חיים בודדים לצורך אפיון גנומי או מולקולרי נוסף.
מיקרו-מניפולציה של תא בודד מאפשרת בידוד מדויק של תאי סרטן בודדים, ובכך תומכת בניתוח מולקולרי ברזולוציה גבוהה בשלבים הבאים. יכולת זו היא קריטית לפירוק ההטרוגניות התאית ולהגברת הביטחון החזוי בגילויים מוקדמים ובמחקר טרנסלציונלי. שילוב של בידוד מדויק שכזה בתהליכי מו"פ משפר את תיקוף המטרה ואת קבלת החלטות לגבי תיק השקעות מותאם סיכונים.
טכניקה זו למיקרו-מניפולציה מתאימה לממשק שבין שלבי הגילוי המוקדמים למחקר הפרה-קליני, ומאפשרת ניתוח של תאים בודדים מתוך תרחיפי תאי סרטן הטרוגניים.
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026