דגימת תא בודד באמצעות מיקרודיסקציה לכידת לייזר: טכניקה לקצירת תאי מטרה מאוכלוסיית תאים הטרוגנית

מיקרו-דיסקציה של לכידת לייזר עוזרת להשיג תא מטרה בודד מתערובת תאים שהוכנה על שקופית זכוכית. התחל בלקיחת מגלשת זכוכית מתאימה המצופה בקרום חדיר UV ואינרטי ביוכימי על פני השטח שלו. חשוף את השקופית לאור UV כדי להפוך אותה להידרופילית יותר להיצמדות טובה יותר של התאים.

הרכיבו את השקופית למנגנון ציטוצנטריפוגה. הוסף תרחיף תאים ליציאת המשפך של המכשיר. ציטוצנטריפוגה כדי לאפשר לכוח הצנטריפוגלי להתרכז ולהפקיד שכבה אחת של תאים על שטח קטן על מגלשת הזכוכית. הניחו למגלשה להתייבש באוויר.

הנח את השקופית, עם צד הדגימה כלפי מעלה, מתחת למיקרוסקופ מיקרודיסקציה בלייזר. הגדר את האזור המקיף את התא המעניין. כעת, מקדו את קרן הלייזר כדי לנתח את האזור המכיל את תא המטרה יחד עם ציפוי הממברנה. לאחר מכן, בטל את המיקוד של קרן הלייזר ופולס אותה כדי ליצור לחץ. אנרגיה זו מזניקה את האזור המנותח לתוך המכסה ההפוך של צינור איסוף שהורכב מראש המכיל חיץ הממוקם מעל השקופית.

אחזר את הצינור וסגור את המכסה. סובב את הצינור כדי להביא את המאגר המכיל את תא המטרה היחיד לתחתית הצינור. מקררים את הצינור עד לניתוח נוסף.

עבור מירקודיסקציה בלייזר, ציטוצנטריפוגה את כל 300 המיקרוליטרים של תרחיף התאים על שקופית מצופה ממברנה ב-300 x גרם למשך 5 דקות. לאחר מכן, הנח את השקופית המצופה ממברנה על מיקרוסקופ המסוגל לבצע דיסקציה בלייזר. לאחר מכן, פיפט 4.5 מיקרוליטר של מאסטר ליזיס תאים מערבב לתוך המכסה של צינור ה-PCR בנפח 0.2 מיליליטר.

הנח את המכסה מעל הדגימה וקצור תא בודד על ידי מיקרו-דיסקציה בלייזר. מיד לאחר מכן, בדוק אם יש תאים מבודדים במכסה ה-PCR. הסר את צינור ה-PCR ממיקרוסקופ הלייזר מירקודיסקציה וסגור את הצינור. אוספים את כל הנוזלים בתחתית הצינור בסיבוב קצר.