יצירת תאי סרטן ערמונית כימותרפיים: הליך להשגת תאי סרטן עמידים לתרופות במבחנה

כדי ליצור תאים עמידים לכימותרפיה, התחל בנטילת תרחיף תאי סרטן הערמונית האנושיים בבקבוק תרבית. דגרו את הבקבוק כדי להקל על היצמדות התאים וחלוקתם ליצירת שכבה חד-שכבתית.

השלם את התאים בתמיסה אנטי סרטנית בריכוז אופטימלי ודגירה. מולקולות התרופה נכנסות לתאים וגורמות לאפופטוזיס בתאים רגישים.

תאים מסוימים מבטאים מובילי פליטת תרופות מיוחדים או משאבות המסירות מעת לעת את התרופות. מנגנון זה מונע הצטברות תרופות, ומאפשר לתאים אלה לעמוד בפני השפעת תרופות אנטי סרטניות ולהפוך לעמידים לכימותרפיה.

שאפו את המדיה המכילה סמים ופסולת מהתרבית. תוסף עם מצע גידול טרי ללא תרופות כדי לתמוך בצמיחה של תאים עמידים לכימותרפיה. השלך את המדיה המושקעת. נסה את התאים כדי לנתק אותם מבקבוק התרבית ולהעביר אותם לצינור.

צנטריפוגה את הצינור כדי לגלול את התאים. הסר את הסופרנטנט המכיל טריפסין. השעו מחדש את התאים באמצעי גידול טריים. לגדל את התאים בבקבוק תרבית חדש.

לאחר מכן, חזור על שלבי הטיפול התרופתי ותרבית התאים כדי לחשוף את התאים העמידים לכימותרפיה למינונים הולכים וגדלים של אותה תרופה אנטי סרטנית. טכניקה זו מסננת את התרבית על ידי סילוק כל התאים הרגישים כדי ליצור מאגר של תאים שורדים עמידים מאוד לכימותרפיה.

כדי להתחיל בהליך זה, צלחת תאי DU145 או 22Rv1 בצלוחיות בגודל 150 סנטימטר רבוע המכילות 20 מיליליטר מדיה. לאחר 24 שעות, כאשר התאים נמצאים במפגש של כ-70% עד 80%, הוסף דוסטקסל ב-5 ננו-מולארי.

לאחר 72 שעות, שאפו את המדיה המכילה תרופה והוסיפו מדיה טרייה ללא דוסטקסל. החלף את המדיה כל 3 עד 4 ימים, והמתן שבוע עד שבועיים עד שיופיעו שיבוטים בבקבוק. שאפו את התקשורת. שטפו בזהירות את התאים עם 15 מיליליטר PBS ודגרו אותם עם 4 מיליליטר של 0.05% טריפסין-EDTA למשך 3 עד 5 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס כדי לנתק את התאים משטח הבקבוק. לאחר מכן, השעו מחדש את התאים הטריפסינים מהבקבוק באמצעות 8 מיליליטר של מדיה טרייה.

אסוף את התאים מכל הצלוחיות המטופלות וגלגל אותם באמצעות צנטריפוגה. לאחר מכן, הסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את כדור התא ב-20 מיליליטר של מדיה טרייה וצלחו את התאים בצלוחיות של 150 סנטימטר מרובע.

לאחר 24 שעות, כאשר התאים נמצאים במפגש של כ-70% עד 80%, הוסיפו שוב 5 דוסטקסל ננו-מולרי. חזור על ההליכים כפי שהוצג קודם לכן עד שהשיבוטים יופיעו בבקבוק. לאחר מכן, צלחו שוב את התאים בצלוחיות בגודל 150 סנטימטר מרובעות.

לאחר 24 שעות, כאשר התאים נמצאים במפגש של כ-70% עד 80%, טפל בהם עם דוסטקסל 10 ננו-מולרי. חזור על אותם שלבים בצורה של העלאת מינון דוסטקסל והמשך לאגד את השיבוטים ששרדו לאחר כל טיפול ריכוז. בסוף התהליך תקבלו מאגר של תאים עמידים מוכנים לשימוש ניסיוני.