אפיון עמידות לכימותרפיה תפקודית: שיטה להערכת עמידות לתרופות בתאים סרטניים באמצעות בדיקה קלונוגנית

כדי להעריך עמידות לכימותרפיה בתאי סרטן, התחל בלקיחת צלחת מרובת בארות. זרע תרחיף של תאי סרטן הערמונית הרגישים לתרופות הרצויים לכמה בארות והשעיה של הגרסה העמידה לתרופות של התאים לבארות הנותרות.

דגרו את התרבות כדי להקל על הצמדת התאים לצלחת התרבות. טפל בשני סוגי התאים במגוון מינונים הולכים וגדלים של תמיסת התרופה שנבחרה. מולקולות התרופה נכנסות לתאים הרגישים וגורמות למוות תאים גם בריכוזים הנמוכים ביותר שלהן. עם זאת, התאים העמידים מוציאים את מולקולות התרופה באמצעות משאבות פליטת תרופות מיוחדות, מה שמאפשר את הישרדותם למרות החשיפה לריכוזי תרופות גבוהים יותר.

לשאוף את המדיה המבוזבזת המכילה פסולת ותמיסת תרופות. תוסף עם מצע גדילה טרי ללא תרופות. דגירה כדי לאפשר לתאים העמידים לתרופות ששרדו להתרבות וליצור מושבות. הוסף תמיסת צביעה מתאימה לצביעת מושבות התאים החיים.

שוטפים את התרבות כדי להסיר עודפי צבע. ספרו את מספר המושבות הצבעוניות בכל באר. הבארות המכילות תאים רגישים לתרופות מחזיקות מעט מאוד מושבות בנות-קיימא. לעומת זאת, הבארות המכילות תאים עמידים לתרופות מציגות מספר גבוה יותר של מושבות. עם זאת, תאים עמידים לתרופות אלה מציגים ירידה במספר המושבות עם מינוני תרופות הולכים וגדלים.

בהליך זה, צלחת 2,000 תאים באמצעות 2 מיליליטר מדיה לבאר בצלחות 6 הבארות. לאחר 24 שעות, הוסף ריכוזים הולכים וגדלים של דוסטקסל עבור שורות התאים DU145 ו-22Rv1. הוסף DMSO רק לבאר אחת כבקרה באותו נפח המשמש למינון הדוסטקסל הגבוה ביותר. לאחר 72 שעות, שאפו את המדיה המכילה תרופה והוסיפו מדיה טרייה ללא דוסטקסל.

דגרו על הצלחות למשך שבוע עד שבועיים עד שהמושבות נראות במיקרוסקופ. כדי להכתים את המושבות, יש לשטוף אותן בעדינות עם 2 עד 3 מיליליטר PBS ולדגור אותן עם 2 עד 3 מיליליטר תמיסת סגול קריסטל למשך 20 דקות בתוך מכסה המנוע של תרבית הרקמות או מכסה אדים.

לאחר מכן, הסר את תמיסת הצביעה ושטוף את הצלחות עם 2 עד 3 מיליליטר מים. לאחר מכן, הסר מים וייבש את הצלחות באוויר. צלם תמונות דיגיטליות של הלוחות לייצוג דמויות. נתח את התוצאה על ידי הדמיה של הבארות וספירה ידנית של המושבות בעזרת עט סמן וייצג את אחוז כדאיות התאים בגרף.