אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:45 דק׳ • April 30th, 2023
אוטופגיה היא תהליך תוך-תאי המאפשר פירוק של רכיבים ואברונים ציטופלזמיים לא רצויים בתוך תאי עיכול מיוחדים הנקראים ליזוזומים. כדי להעריך אוטופגיה, התחל בתרבית דבקה של תאי סרטן הערמונית המבטאים חלבוני סמן אוטופאגי הנקראים LC3 בשילוב עם חלבונים פלואורסצנטיים ירוקים.
מטבעם, לתאי סרטן הערמונית חסר האנזים ארגינינוסוקסינט סינתאז הדרוש לסינתזה של חומצות אמינו ארגינין. תאים אלה, אם כן, תלויים בתוספי ארגינין חיצוניים באמצעות מדיה להישרדות והתפשטות.
לאחר מכן, טפל בתאים באמצעות ארגינין דימינאז או ADI. ADI מבצע הידרוליזה של ארגינין חופשי במדיה, מה שמוביל לדלדול ארגינין. כתוצאה מכך, התאים עוברים לחץ מטבולי, ומתחילים תגובה אוטופאגית פנימית. במקביל, טפלו בתאים בצבע פלואורסצנטי אדום שמסמן ליזוזומים בתוך התאים.
במהלך אוטופגיה, מבנים קרומיים בצורת הנקראים פגופורים מתאספים סביב הרכיבים הציטופלזמיים הפגועים. בסופו של דבר, הם מתרחבים ואוטמים את המטען שלהם תוך כדי צימוד עם חלבוני סמן אוטופאגיים LC3 ליצירת שלפוחיות כפולות או אוטופאגוזומים. חלבוני LC3 מספקים גם תגים פלואורסצנטיים לאוטופאגוזומים. לאחר מכן השלפוחיות מתמזגות עם ליזוזומים ליצירת אוטוליזוזומים. פרוטאזות ליזוזומליות בתוך האוטוליזוזומים מפרקות את הרכיבים התאיים הנבלעים.
בזמן אמת, התבונן בפלואורסצנטיות הבהירה מאוטופאגוזומים וליזוזומים כדי לקבוע את ה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים