העשרת פוספופפטידים: טכניקת משקעים חיסוניים מבוססת נוגדנים להפרדת פפטידים זרחניים ספציפיים מתערובות פפטידים מורכבים

זרחון של שאריות חומצות אמינו ספציפיות, כמו טירוזין, מייצר פוספופפטידים הממלאים תפקידים קריטיים בוויסות מספר מסלולי איתות תאיים. חקירתם מאפשרת זיהוי סמנים ביולוגיים פוטנציאליים לטיפול בסרטן.

כדי לבודד פוספופפטידים, התחל עם אבקה ליופילית של עיכול פפטידים מטוהרים המופקים מרקמת סרטן. השעו מחדש את האבקה במאגר מתאים להכנת תרחיף פפטיד אחיד. שמרו על pH ניטרלי כדי להבטיח יציבות פפטידים.

הכן תרחיץ המורכב מחרוזי הידרוג'ל מצומדים לנוגדנים אנטי-פוספופפטידים ספציפיים במאגר הרצוי. הוסף את תמיסת החרוזים לתרחיף הפפטיד. הנוגדנים המשותקים על החרוזים מזהים ונקשרים לשאריות חומצות האמינו הזרחניות הספציפיות שלהם בתוך הפוספופפטידים, ויוצרים קומפלקסים.

צנטריפוגה את התערובת כדי לאסוף את קומפלקסי הפוספופפטיד-חרוזים בגלולה. הסר את הסופרנטנט המכיל פפטידים לא קשורים או פוספופפטידים לא ספציפיים. הוסף מאגר פליטת pH נמוך מתאים למתחמים ודגירה. ה-pH הנמוך מחליש את האינטראקציה בין שאריות הפוספופפטידים לקומפלקסים של נוגדנים-חרוזים, ומשחרר את הפפטידים לתמיסה.

מעבירים את התערובת למחסנית פילטר שהורכבה מראש. צנטריפוגה כדי להוציא את הפוספופפטידים המשוחררים לתוך צינור האיסוף. רכז ואקום את הדגימה בטמפרטורה גבוהה כדי להסיר את המאגר ולקבל גלולה יבשה מרוכזת של פוספופפטידים טהורים.

השעו מחדש את האבקה הליופילית עם 0.5 מיליליטר של