העשרה על בסיס טיטניום דו-חמצני של פוספופפטידים: שיטה לבידוד סלקטיבי של פוספפטידים מספריית הפפטידים:

0 views • 3:33 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פוספופפטידים הם מחרוזות קצרות של חומצות אמינו המכילות שאריות סרין, תראונין או טירוזין זרחניות. כדי לבודד פוספופפטידים מתערובת פפטידים, התחל בלקיחת חרוזי טיטניום דו חמצני בשפופרת. שיווי משקל כדי לרכך את החרוזים באמצעות מאגר קשירה מחומצן מתאים המכיל חומר מרווה. הוסף את הריכוז הרצוי של תערובת הפפטידים לתמיסת החרוזים.

דגרו את התערובת בניעור מתמשך כדי למנוע מהחרוזים להתייצב. המצב החומצי מקדם את קבוצת הפוספט של פוספופפטידים ליצירת קשרי קואורדינטות עם חרוזי טיטניום. חומר המרווה במאגר מפחית כל קשירה לא ספציפית של פפטידים שאינם זרחניים לחרוזים, ומשאיר אותם בתרחיף.

צנטריפוגה כדי לגלול את החרוזים הקשורים לפוספופפטיד, בעוד שהפפטידים הלא זרחניים נשארים בסופרנטנט. השליכו את הסופרנטנט. העבירו את החרוזים הקשורים לפוספופפטיד לעמודת מסנן ספין שהורכבה מראש. צנטריפוגה להסרת מאגר הקישור ולכידת החרוזים המצומדים לפוספופפטיד.

העבירו את המסנן לצינור נקי והוסיפו תמיסה המכילה אמוניה. אמוניה הופכת את התרחיף לבסיסי, וגורמת לפוספופפטידים להתנתק מהחרוזים. צנטריפוגה את המכלול כדי לחסל ולאסוף את הפוספופפטידים הלא קשורים. חרוזי הטיטניום הדו חמצני נשארים במחסנית המסנן. יבש את הפוספופפטידים כדי להסיר עקבות אמוניה.

הכינו מראש את הטיטניום הדו-חמצני ב-500 מיקרוליטר של 100% ACN פעמיים. לאחר מכן, התנו את הטיטניום הדו-חמצני ב-500 מיקרוליטר של מאגר נתרן פוספט 0.2 M, pH 7, פעמיים. לבסוף, השתמש ב-300 מיקרוליטר של מאגר שיווי משקל כדי לשטוף את החרוזים שלוש פעמים. הוסף 400 מיקרוליטר של 50% ACN, 0.1% TFA לצינור קושר החלבון הנמוך. לאחר מכן, הוסיפו 84 מיקרוליטר חומצה לקטית.

העבירו את הפוספופפטידים המרחפים לתוך הצינור הנמוך הקושר חלבון ודגרו אותם בטמפרטורת החדר באמצעות מסובב קצה על קצה למשך שעה. לאחר גלולת החרוזים, השתמש ב -300 מיקרוליטר של מאגר שיווי משקל כדי לשטוף אותם פעמיים ולסובב אותם כלפי מטה. עם 300 מיקרוליטר של מאגר שטיפה, שטפו את החרוזים פעמיים. לאחר מכן, העבירו אותם למסנן ספין של 0.2 מיקרומטר.

לאחר הסיבוב, העבירו את יחידת המסנן לצינור נקי של 1.5 מיליליטר קושר חלבון נמוך, ועם 200 מיקרוליטר של 0.9% אמוניום במים, יש להוציא את התכולה פעמיים. לאחר בדיקת ה-pH, יש לרכז בוואקום את ה-eluate ליובש למשך הלילה כדי לאדות את האמוניה.

10:27

הכנת תיאום מאוד נקבובי פולימר ציפויים על מונוליתים פולימר Macroporous להעשרה משופרת של Phosphopeptides

Related Videos

0 Views

08:01

LERLIC-MS / MS עבור אפיון מעמיק וכימות של גלוטמין ו asparagine Deamidation ב פרוטאומיקה Shotgun

Related Videos

0 Views

05:47

אסטרטגיה פוספוטומית ליצירת פרופיל של איתות מתח אוסמוטי ב- Arabidopsis

Related Videos

0 Views

06:09

כימות של חלבונים באמצעות העשרה Immunoaffinity פפטיד יחד עם ספקטרומטריית מסה

Related Videos

0 Views

03:21

טיהור פפטידים: טכניקה מבוססת RP-HPLC למיצוי פפטידים מליזטים חלבונים מעוכלים

Related Videos

0 Views

04:50

העשרת פוספופפטידים: טכניקת משקעים חיסוניים מבוססת נוגדנים להפרדת פפטידים זרחניים ספציפיים מתערובות פפטידים מורכבים

Related Videos

0 Views

09:30

ניתוח Phosphopeptide של מכרסמים epididymal תאים-זרע

Related Videos

0 Views

12:23

העשרה Phosphopeptide בשילוב עם ספקטרומטר מסה ללא תווית כמותיים כדי לחקור את Phosphoproteome סרטן הערמונית

Related Videos

0 Views

11:54

איתור מקומות לגילוי החלבון על ידי העשרה מפפטיד וספקטרומטר מסה

Related Videos

0 Views

12:11

העשרת אהדה בו של שני שינויים שלאחר ההעברה לקוונפיקציה ולוקליזציה לאתר

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026