אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:43 דק׳ • April 30th, 2023
טכניקת הטמעת פרפין קבועה בפורמלין או FFPE מאפשרת שימור של דגימות רקמה קבועות, מיובשות ונקיות בתוך גושי פרפין לאחסון לטווח ארוך. FFPE משמר חלבונים ורכיבים תוך-תאיים חיוניים אחרים מבלי לפגוע במורפולוגיה של הרקמות.
דה-פרפיניזציה, או הסרת שעוות פרפין המקיפה את הרקמה המוטמעת, היא שלב קריטי לפני עיבוד כל דגימת רקמת FFPE לניתוח במורד הזרם. כדי להתחיל בדפרפיניזציה, התחל עם מגלשת זכוכית הנושאת קטע רקמה FFPE לא מוכתם בעל עובי מתאים.
טבלו את קטע הרקמות באמבט קסילן ודגרו למשך הזמן הרצוי. קסילן, ממס אורגני, ממיס את שעוות הפרפין שנטמעה וחדרה לרקמה. ההסרה המלאה של שעוות הפרפין חושפת את דגימת הרקמה השקופה הקבועה והמיובשת.
לאחר דה-פרפיניזציה, יש לטפל בדגימה באתנול מוחלט. אתנול עוקר ומסיר כל עקבות של קסילן מקטע הרקמה. לאחר מכן, טבלו את הרקמה בריכוזים הולכים ופוחתים של אתנול. התהליך מייבש את הרקמה לניתוח היסטולוגי במורד הזרם.
לבסוף, השאר את השקופית ללא הפרעה למשך הזמן הרצוי. שלב זה מאפשר לאתנול ומים להתאדות ולקבל קטע רקמה יבש ויבש.
כדי להתחיל, הכינו 10 מיקרומטר של קטעים משובצי פרפין קבועים בפורמלין לא מוכתמים. הנח את השקופיות במחזיק שקופיות זכוכית ומלא אותו בקסילן, וודא שכל הרקמות בשקופית שקועות. השאירו את השקופיות בקסילן למשך 15 דקות. לאחר מכן, שפכו את הקסילן תוך כדי החזקת השקופיות עם קצה פיפטה כדי שלא ייפלו. יוצקים פנימה עוד קסילן לאותה רמה כמו קודם וחוזרים על הדגירה.
שפכו את הקסילן ומלאו את מחזיק השקופיות ב-100% אתנול, וודאו שכל הרקמות בשקופית שקועות לחלוטין. השאירו את השקופיות באתנול למשך 3 דקות. לאחר מכן, החליפו את האתנול באתנול טרי והניחו להם לדגור עוד שתי דקות. יוצקים את האתנול ומסירים את השקופיות. הניחו אותם בזהירות עם הפנים כלפי מעלה על מגבת נייר נקייה והניחו להם להתייבש במשך 10 דקות.