אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:31 דק׳ • April 30th, 2023
כדי להתחיל במאקרודיסקציה, קח מגלשת זכוכית הנושאת דגימת רקמה. בנוסף, קח שקופית ייחוס הנושאת את אותה דגימת רקמה וצבוע אותה באמצעות המטוקסילין ואאוזין לצביעת H&E.
בתאים נורמליים, המטוקסילין מעניק כתם כחול לחומצות גרעין, בעוד שכתם הנגד של אאוזין מראה את חלבוני התא בוורוד. הצבע הכחול העמוק של הגרעין מסייע בהבחנה בין תאים סרטניים לתאים רגילים.
שכבו את השקופית המוכתמת של H&E עם השקופית הלא מוכתמת כדי ליישר את דגימות הרקמה. אתר את החלק המכיל תאי גידול בשקופית הצבועה ב-H&E. סמן את האזור המתאים בשקופית הלא מוכתמת.
מגרדים את הרקמה הרצויה מהשקופית הלא מוכתמת. בעזרת קצה פיפטה רטוב, אוספים את הרקמה המגורדת כדי להבטיח העברה קלה של דגימת הרקמה. העבירו את הרקמה לצינור המכיל מאגר ליזה. מרכיבי מאגר הליזיס מעכלים את הרקמה, ומשחררים את מרכיבי התא.
טפלו בליזאט עם פרוטאז מתאים ודגרו בטמפרטורה גבוהה. הפרוטאז מבקע את ה- DNA המזהם, ובכך מגן על ה- DNA מפני השפלה. אחסן את ה-DNA המכיל ליזאט רקמה לניתוח במורד הזרם.
לזהות רקמות סרטניות באזור הגידול המתאימות ביותר למקרודיסציה על פי החתך הצבוע H&E המתאים. לאחר מכן, נתח את רקמת הסרטן על סמך החלק המסומן. קח סכין גילוח נקי וגרד בעדינות את רקמת הסרטן מהמגלשה, מנסה לשמור אותה בחתיכה אחת. השתמש בקצה הפיפטה כדי להעביר את הרקמה המגורדת לבקבוקון חיץ הליזיס.
חזור/י על תהליך זה עם שאר השקופיות. לאחר שכל הרקמה נמצאת בצינור, השתמש בקצה כדי לוודא שהרקמה שקועה במלואה ואינה דבוקה לקיר. הוסיפו לבקבוקון 20 מיקרוליטר של פרוטאז סרין הקשור לסבטיליזין והחליקו בעדינות כדי לערבב. הניחו את הבקבוקון בגוש חום של 55 מעלות צלזיוס למשך 4 שעות לפחות או למשך הלילה, והקפידו להתערבל מעט לאחר שעתיים.