אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:36 דק׳ • April 30th, 2023
מתילציה של DNA כוללת תוספת של קבוצת מתיל לשאריות ציטוזין של DNA ליצירת מתיל-ציטוזין, מה שגורם לשינוי DNA ולוויסות ביטוי גנים.
כדי לחקור מתילציה של DNA, התחל בנטילת תמצית DNA גולמית מתאים סרטניים. מוסיפים מאגר דילול ודוגרים בטמפרטורת החדר. המאגר מדלל את התערובת ומפרק את ה-DNA הדו-גדילי ל-DNA חד-גדילי, ומעדיף את הנגישות של בסיסים לתגובות הבאות.
הוסף מגיב המרה ודגר בחושך. נתרן ביסולפיט במגיב מפעיל את הסולפונציה ואת הפירוק שלאחר מכן של שאריות ציטוזין לא מתיליות, וכתוצאה מכך היווצרות אורציל-סולפונט. עם זאת, שאריות ציטוזין מתילציה נותרות ללא שינוי.
לאחר מכן, השלם את ה-DNA עם מאגר מחייב והעביר אותו לעמודת מסנן ספין שהורכבה מראש. המאגר עוזר ל-DNA להיקשר למסנן.
צנטריפוגה להסרת תערובת המאגר והמגיב הביסולפיט מה-DNA הכלוא בעמודה. השליכו את הזרימה. הוסף מאגר הסרת סולפונציה אלקליין ל- DNA. המאגר מסייע בהסרת קבוצת סולפיט מאורציל-סולפונאט ליצירת אורציל.
צנטריפוגה להסרת המאגר המשומש. כעת, הוסף מאגר פליטה לעמודה כדי להוציא את ה-DNA שהומר. בצע PCR כדי להגביר את ה-DNA. כל שאריות האורציל שהומרו מתגברות כתימינים, בעוד שאריות הציטוזין המתיליאטיות מתגברות כציטוזינים.
רצף שאריות ציטוזין של ה-DNA המוגבר ליצירת פרופיל מתילציה של הדגימה.
יש לבצע את הטיפול בביסולפיט על 45 מיקרוליטר מהרקמה המעוכלת באמצעות ערכת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים