צביעת סיבים אלסטיים של קטעי שקופיות: טכניקה לצפייה בגרורות סרטן קיבה
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:00 דק׳ • April 30th, 2023
צביעת סיבים אלסטיים מסייעת לבחון פלישת תאים סרטניים מעבר ללמינה האלסטית הצפק או הרקמה האלסטית התת-מזותלית.
כדי להתחיל, הוסף תמיסת אשלגן פרמנגנט לקטע רקמה מעובדת, ואחריו טבילה בחומצה אוקסלית. תכונת החמצון החזקה של שילוב אשלגן פרמנגנט-חומצה אוקסלית מלבינה את הפיגמנט הטבעי מקטע הרקמה כדי למנוע הפרעה לתהליך הצביעה על ידי טשטוש מורפולוגיה של סיבים אלסטיים.
שטפו את השקופית במים ואתנול כדי להסיר שאריות של חומר הלבנה. לאחר מכן, דגרו את הדגימה בכתם אלסטין המורכב מקומפלקס ברזל-המטוקסילין. לאלסטין, מרכיב הסיבים האלסטיים העיקרי, יש זיקה חזקה למתחמי ברזל-המטוקסילין.
שטפו את השקופית באתנול ומים כדי להסיר כל כתם שנותר. לבסוף, טפל בדגימה עם כתם נגדי המכיל חומצה פיקרית ופונסו S. מולקולות החומצה הפיקרית הקטנות יותר חודרות לכל סוגי הרקמות אך נשמרות היטב על ידי תאי השריר ותאי הסרטן בעלי המרקם הקרוב. לעומת זאת, מולקולות Ponceau S הגדולות יותר מחליפות חומצה פיקרית בקולגן בעל המרקם הנקבובי, מה שגורם לקולגן להיות צבוע באופן שונה מתאי השריר והסרטן.
כאשר הם נצפים במיקרוסקופ, סיבים אלסטיים מופיעים כחוטים כחולים-שחורים. קולגן מכתים באדום, בעוד שתאי שריר ותאי סרטן נראים צהובים. תאי סרטן צהובים החודרים ללמינה האלסטית הכחולה-שחורה מאשרים פלישה גרורתית.
ראשית, השתמש בנייר טישו כדי לנגב כל תמיסה עודפת על השקופית א
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים