פיצול ספרואידים לתת-תרבית ומשלוח: הליך להפצה והעברה של ספרואידים מגידול נוירואנדוקריני במעי הדק

ספרואידים הם תרביות מבחנה של תאים שנצברו בעצמם ליצירת מבנים כדוריים תלת מימדיים. להפצת ספרואידים של גידול, התחל עם ספרואידים שגודלו במטריצה חוץ-תאית מתאימה, או ECM, הכלולה בצלחת תרבית.

טריטוראט באמצעות מיקרופיפטה כדי לשבור את ה- ECM באופן מכני ולשחרר את הספרואידים. העבירו את תערובת הספרואיד-ECM לצינור מיקרו-צנטריפוגה.

צנטריפוגה במהירות נמוכה כדי לגלול את הספרואידים ולהפריד אותם מה-ECM בסופרנטנט. השליכו את הסופרנטנט המשומש המכיל ECM. העבירו את הצינור המכיל את הכדור הספרואיד על קרח כדי למנוע התמצקות ECM במהלך השלבים הבאים.

השלם את הגלולה עם ECM נוזלי טרי. לתת-תרבית, ערבבו את התוכן על ידי פיפטינג למעלה ולמטה שוב ושוב כדי לנתק את התאים הספרואידים ולשחרר אותם לתרחיף.

זרעו את התערובת הזו המכילה תאים יוצרי ספרואידים ו-ECM לכלי תרבית טרי. ECM מתמצק, ומאפשר ללכוד תאי גידול. הוסף את מצע הגידול הרצוי. דגירה כדי להקל על צמיחת תאים לכודים לספרואידים חדשים.

למטרות משלוח, העבירו את תערובת הספרואיד-ECM לבקבוק תרבית. אפשר ל-ECM להתמצק וללכוד את הספרואידים שבתוכו.

מלאו את הבקבוק במצע גידול כדי למנוע גזירת תאים וכדי לשמור על כדאיות הספרואידים. העבירו את הבקבוק לחבילת משלוח.

שוברים מכנית את ה- ECM בעזרת פיפטה P1000 ומעבירים אותה לצינור סטרילי בגודל 1.5 מילימטר. צנטריפוגה של הצינור ב-1,000 x גרם ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הסירו את כל החומר הנוזלי והניחו את הצינור על קרח. הוסף פי שניים עד ארבעה מנפח ה-ECM החדש לגלולה וערבב את תכולת הצינור על ידי פיפטינג למעלה ולמטה 10 פעמים, תוך הקפדה על הימנעות מהכנסת בועות אוויר.

העבירו 5 עד 20 מיקרוליטר של ה-ECM בתערובת SBNET לצלחת חדשה של 96 בארות ואפשרו ל-ECM להתמצק. לאחר מכן, כסו את ה-ECM המוצק במדיום SBNET חדש והכניסו את הצלחת לחממה. אם שולחים ספרואידים SBNET למעבדה אחרת, העבירו את הספרואידים עם ה-ECM החדש לבקבוק T25 ואפשרו ל-ECM להתמצק. מלאו את הבקבוק במדיום כדורי SBNET, הברג את המכסה בחוזקה והכן את חבילת המשלוח.