מיקרוסקופ פלואורסצנטי של מלכודות חוץ-תאיות נויטרופילים או NETs: טכניקה לצפייה באינטראקציה דבקית בין תאים סרטניים לבין NETs
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:15 דק׳ • April 30th, 2023
בתנאים פתולוגיים כמו סרטן, נויטרופילים מופעלים משחררים מלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים או NETs - רשת של DNA חוץ-תאי עם אנזימים קשורים וחלבונים אנטי-מיקרוביאליים - הלוכדים תאים סרטניים במחזור הדם.
כדי להמחיש את האינטראקציה הדביקה בין NETs לתאי גידול במבחנה, התחל בתרבית נויטרופילים בצפיפות נמוכה, תת-סוג נויטרופילים, בצלחת תרבית מצופה פולימר המקדמת הצמדת תאים. דגירה במשך כמה שעות כדי לעורר את הנויטרופילים ליצור NETs דמויי רשת.
הוסף תרחיף של תאים סרטניים אדומים המסומנים בפלואורסצאין לתרבית הנויטרופילים. דגרו על תאי הסרטן עם NETs לתקופה קצרה כדי להקל על אינטראקציה בין תא סרטני ל-NET. ה-NET-DNA פועל כגורם כימוטקטי המושך תאים סרטניים ומקדם את הדבקתם ל-NETs.
הסר את המדיום המושקע. שטפו בעדינות את התרבית במדיום טרי מתאים כדי להסיר היטב תאי גידול לא מחוברים מהתרבית.
כעת, הוסף כתם גרעיני פלואורסצנטי ירוק אטום לממברנה כדי לצבוע את ה-NETs החוץ-תאיים באופן סלקטיבי. התבונן בתרבית תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. מלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים מופיעות כמבנים דמויי חוט ירוק היוצרים רשת שאליה מחוברים תאי גידול אדומים.
השעו מחדש את הנויטרופילים המבודדים בצפיפות נמוכה ב-5 כפול 10 עד שישי תאים למיליליטר של מדיום RPMI 1640 בתוספת ריכוז FBS וזרע 1 מיליליטר של נויטרופילים לבאר על צלחת מצופה פולי-L-ליזין עם 6
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים