זהב immunostaining של חתכים אקסוזומליים: טכניקה כדי לדמיין סמנים אבחון לומן אקסוזומלי

0 צפיות3:36 דק' • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אקסוזומים הם שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות הסוגרות מגוון ביומולקולות המשמשות כסמנים ביולוגיים לסרטן.

כדי להמחיש סמנים ביולוגיים אקסוזומיים, התחל עם מקטעים אקסוזומיים משובצים בשרף דק במיוחד הנתמכים ברשתות מתכת מתאימות של מיקרוסקופ אלקטרונים. דגרו את הרשתות בטיפות גליצין. גליצין קושר ומנטרל קבוצות אלדהיד תגובתיות בקטעים כדי להתגבר על הפרעתם לבדיקה.

שטפו את הדגימה במים כדי להסיר ריאגנטים שנותרו. לאחר מכן, דגרו את הדגימה במאגר חוסם. המאגר נושא חלבוני סרום החוסמים אתרי קשירת נוגדנים לא ספציפיים בדגימה.

לאחר מכן, דגרו את הדגימה בתמיסת הנוגדנים הראשונית הרצויה. נוגדנים אלה מזהים ונקשרים לסמנים הביולוגיים שלהם הממוקמים בלומן האקסוזומי. שטפו את כל הנוגדנים הלא קשורים עם מאגר מתאים.

כעת, העבירו את הרשתות נושאות הדגימה לטיפות המכילות נוגדנים משניים מצומדים לזהב הנצמדים לנוגדנים הראשוניים. ננו-חלקיקי הזהב משמשים כסמנים צפופי אלקטרונים כדי להמחיש את הלוקליזציה העדינה של מולקולות המטרה. שטפו את כל הנוגדנים המשניים הלא קשורים עם מאגר מתאים.

לבסוף, בתנאים חשוכים, דגרו את הרשתות ברצף בתמיסות אורניל אצטט וציטראט עופרת. ריאגנטים אלה של מתכות כבדות מכתימים ומשפרים את הניגודיות של מולקולות אורגניות כמו שומנים, חלבונים וגליקוגנים בדגימה, ומבדילים אותם מהרקע.

התבונן בחלקים המוכתמים תחת מיקרוסקופ אלקטרונים שידור. סמנים ביולוגיים מסומנים בזהב מופיעים כחלקיקים כהים בתוך הלומן של מבנים אקסוזומיים מוכתמים במתכות כבדות.

כדי להתחיל, דגרו רשתות המכילות קטעים לא מוכתמים בעובי 60 ננומטר בטיפות של 50 מיקרוליטר של 0.02 M גליצין למשך 10 דקות כדי להרוות את קבוצות האלדהיד החופשיות. לאחר מכן, שטפו את החלקים ב-100 מיקרוליטר מים מזוקקים שלוש פעמים למשך 10 דקות כל אחד. לאחר השטיפה האחרונה, יש לדגור על החלקים למשך שעה בטמפרטורת החדר ב-PBS המכיל 1% BSA. לאחר מכן, דגרו את הרשתות בטיפות של 50 עד 100 מיקרוליטר של נוגדן נגד KRS למשך שעה.

לאחר מכן, שטפו את הרשתות חמש פעמים למשך 10 דקות כל אחת בטיפת PBS המכילה 0.1% BSA. לאחר מכן, העבירו את הרשתות לטיפה של נוגדן משני מתאים ודגרו על החלקים למשך שעה בטמפרטורת החדר. כעת, שטפו את הרשתות חמש פעמים למשך 10 דקות כל אחת עם טיפה נפרדת של PBS המכילה 0.1% BSA. צבעו פעמיים את החלקים עם אורניל אצטט 2% למשך 20 דקות בחושך, ואחריו ציטראט העופרת של ריינולד למשך 10 דקות. הנח את החלק המוכתם במיקרוסקופ אלקטרונים שידור וצפה בדגימה באמצעות 80 קילו וולט וצלם אותם באמצעות תוכנת המיקרוסקופ.

11:38

שיטה חדשנית לExosome כימות ומדידה גודל

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:43

פשוטה מלכודות תאיות נויטרופילים אדם בידוד (רשתות) וטיפול

סרטונים קשורים

0 צפיות

13:45

הערכה של תפקוד שלפוחית חוץ-תאית במהלך מלריה זיהום

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:43

בידוד ואפיון של RNA המכיל Exosomes

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:49

Nanogold תיוג של מערכת endosomal שמרים לניתוח Ultrastructural

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:24

ניתוח ברזולוציה גבוהה כמותי immunogold של קולטני קרום ב סינפסות רצועת הכלים רשתית

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:49

ניתוח מירנה Exosomal ב non-small cell סרטן ריאות (NSCLC) מטופלים פלזמה באמצעות qPCR: כלי ביופסיה נוזלי ריאלי

סרטונים קשורים

0 צפיות

11:15

הכנת הדוגמא והדימות של Exosomes על ידי במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:16

אפיון מבוסס על-ידי קרינה פלואורסצנטית מהירה של יחיד חוץ-תאית שלפוחית בדם אנושי עם ניתוח מעקב ננו-חלקיק

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:30

שימוש Nanoplasmon-משופרת פיזור מיקרוסקופ נמוך הגדלה הדמיה כדי לכמת הגידול הנגזר בגידולים

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026