הקפאה מהירה של רקמת שריר לצורך חיתוך: פרוטוקול להשגת מקטעים דקים במיוחד של רקמת שריר מורין שהוקפאה במהירות

הקפאת הצמד היא טכניקה שבאמצעותה דגימות רקמה מוקפאות במהירות לטמפרטורות קרות במיוחד. זה עוזר לשמור על המבנה המקורי של DNA, RNA וחלבונים בתוך הרקמה.

כדי להקפיא את שריר הגפיים, התחל בלקיחת רקמת שריר שזה עתה חולצה מהגפה האחורית של עכבר.

לאחר מכן, קחו חנקן נוזלי בקופסת קלקר וטבלו המכילה איזופנטן - נוזל מוליך מאוד - לחנקן נוזלי.

הקפיאו את האיזופנטן עד שהתמיסה הופכת לצמיגה. במקביל, מרחו טיפה של חומר הקפאה נוזלי על גבי חתיכת פקק

.

מקם את רקמת שריר הגפה האחורית על ידי החזקת הגיד שלה והטמע את חתיכת הרקמה אנכית במדיום ההקפאה הנוזלי. אוריינטציה זו מסייעת בקביעה הבאה של אזור החתך של השריר.

טבלו את חתיכת הפקק עם רקמת שריר מחוברת לזמן קצר לתוך אמבט האיזופנטן המצוננת מראש. זה מסייע בהקפאה מהירה ואחידה של רקמת השריר.

מדיום ההקפאה מתמצק בטמפרטורה נמוכה ויוצר שכבה ג'לטינית סביב רקמת השריר, ומחזיק אותה במקומה. מניחים את גוש השריר במיקרוטום קריו לקבלת חלקים פרוסים דק.

הניחו את החלקים על שקופיות זכוכית ואחסנו אותם בטמפרטורה נמוכה יותר להמשך ניתוח היסטולוגי.

לאחר איסוף כל השרירים, טבלו את החצי התחתון של פלסטיק של 50 מיליליטר המכילה איזופנטן בחנקן נוזלי. כאשר האיזופנטן הופך לצמיג מעט עם בטנת למינציה לבנה מוצקה הנראית בתוך הכוס, שפכו כמה טיפות של מדיום הטבעה על צ'אק.

לאחר מכן, הרם שריר בגיד ומקם בזהירות את