Lamina Propria בידוד תאים חד-גרעיניים: טכניקת צנטריפוגה הדרגתית מבוססת סיליקה להשגת תאים חד-גרעיניים מהמעי הגס של מורין
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:01 דק׳ • April 30th, 2023
למינה פרופריה במעי, הממוקמת מתחת לאפיתל המעי, מורכבת מרקמת חיבור רופפת יחד עם רשת צפופה של סיבי קולגן המכילה מגוון רחב של תאים כגון פיברובלסטים, תאים חד-גרעיניים, כולל לימפוציטים ומונוציטים. תאים אלה ממלאים תפקיד מכריע בשמירה על הומאוסטזיס.
כדי לבודד תאים חד-גרעיניים, התחל בלקיחת שברי מעי גס של עכבר. טפל בשברים בעזרת מאגר עיכול המכיל אנזימי קולגנאז. אנזימי קולגנאז מעכלים את סיבי הקולגן בתוך הרקמה, ומשחררים את התאים לתרחיף.
אספו את הסופרנטנט וסננו אותו דרך מסננות תאים כדי להסיר רקמות ופסולת לא מעוכלות ולקבל תרחיף של תא בודד. הוסף חוצץ צונן לתסנין כדי לנטרל את אנזימי הקולגנאז.
צנטריפוגה להפרדת התאים. השליכו את הסופרנטנט המכיל את האנזימים והשעו מחדש את גלולת התא באמצעי הפרדה מבוסס סיליקה בצפיפות נמוכה. לאחר מכן, שכבו את המתלה על אמצעי הפרדה מבוסס סיליקה בצפיפות גבוהה כדי ליצור שיפוע הפרדה.
צנטריפוגה את התערובת. התאים החד-גרעיניים משקעים ויוצרים שכבה לבנה בממשק בין שכבות שיפוע הצפיפות. העבירו בזהירות את שכבת הממשק הלבנה לתוך צינור טרי המכיל מאגר מתאים.
צנטריפוגה להשגת גלולה המכילה תאים חד-גרעיניים מטוהרים. השהה מחדש את הגלולה במאגר להמשך ניתוח במורד הזרם.
כדי להתחיל, הוסף 20 מיליליטר של מאגר עיכול קולגנאז לצינור המכיל את שברי המעי הגס השטופים. אטמו את הצינור והניחו אותו בשייקר אורביטלי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים