בידוד בלוטות פונדיות קיבה: שיטה לבידוד בלוטות פונדיות מרקמת קיבה אנושית

אצל בני אדם, הפונדוס הוא החלק העליון ביותר של הקיבה. אפיתל פונדי מורכב מבלוטות קיבה רבות המפרישות מיץ קיבה, המסייע לעיכול.

כדי לבודד את בלוטות היסוד של הקיבה, התחל בלקיחת רקמה פונדית אנושית בכוס. הוסף חיץ מתאים לכוס ושטוף את רקמת היסוד במרץ. שטיפה מסירה את הפסולת המזהמת והדם מרקמת היסוד.

מעבירים את הרקמה הנקייה לצלחת פטרי. בעזרת גזה סטרילית יש לנגב את שכבת הרירית המגנה ובכך לחשוף את שכבת האפיתל הבסיסית. בעזרת מלקחיים מגרדים בכוח את שכבת האפיתל העליונה מהרקמה.

מעבירים את האפיתל המגורד לצלחת פטרי אחרת וטוחנים אותו לחתיכות קטנות יותר. מוסיפים את החתיכות הטחונות לבקבוק המכיל חיץ בתוספת אנזימי קולגנאז. דגירה בטמפרטורה הרצויה עם תסיסה מתמדת למניעת גושים.

קולגנאז מעכל את חלבוני המטריצה החוץ-תאיים הקיימים בשכבת האפיתל, ומשחרר את בלוטות הפונדיק לתוך השעיה. מסננים את המתלה לצינור טרי כדי להסיר גושים לא מפורקים.

שמור על תסנין הבלוטות ללא הפרעה על קרח כדי לשקע את הבלוטות. השליכו את הסופרנטנט המכיל פסולת תאים והשעו מחדש את משקעי הבלוטות במאגר טרי. צנטריפוגה ואחסן את כדור הבלוטה עד לשימוש נוסף.

כדי להתחיל, אסוף את הרקמה המוכנה במיכל פלסטיק גדול מלא ב-DPBS ללא סידן/מגנזיום. השאירו את מיכל הפלסטיק על קרח עד לשימוש. לאחר מכן, בעזרת מלקחיים יש לשטוף את הרקמה במרץ בכוס סטרילית, המכילה 100 מיליליטר DP