בידוד מושבת תאים סרטניים גרורתית מתרנגולת CAM: הליך לבידוד תאים סרטניים מתרביות ביצים ללא קליפה

הממברנה הכוריואלנטואית של התרנגולת או CAM היא קרום תלת שכבתי הממוקם ממש מתחת לקליפת הביצה. הוא מורכב מאקטודרם חיצוני, מזודרם וסקולרי מאוד והאנדודרם הפנימי ביותר.

המזודרם CAM מורכב מכלי דם, פיברובלסטים ורכיבים סטרומליים, ובכך מספק סביבה נוחה להתיישבות תאי גידול.

כדי לבודד תאי סרטן מושבים מ-CAM, התחל בנטילת תרבית ביצית ללא קליפה שהוזרקה מראש עם תאים סרטניים בעלי תווית פלואורסצנטית בצלחת. דמיין את תרבית הביצים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. אתר את מושבות הסרטן הגרורתי הפלואורסצנטיות והקומפקטיות.

כרתו בעדינות את רקמת ה-CAM המכילה מושבות גרורות מעניינות. העבירו את רקמת ה-CAM שנכרתה לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה. טוחנים את הרקמה לחתיכות קטנות כדי להפוך את ה-CAM לנגיש לטיפול אנזימטי בשלבים הבאים.

השלימו את הצינור עם אנזים קולגנאז ודגרו. קולגנאז מפרק את חלבון הקולגן במזודרם CAM ויוזם דיסוציאציה של מושבת סרטן. צנטריפוגה את התרחיף כדי לגלול את תאי הסרטן, שאריות רקמת CAM ופיברובלסטים של CAM. השליכו את הסופרנטנט המכיל קולגנאז.

הוסף מצע גידול סלקטיבי והעביר את התרחיף לצלחת תרבית טרייה. מדיה זו מקדמת צמיחה של תאים סרטניים תלויים על פני תאים אחרים. שאפו את התאים הסרטניים ואחסנו אותם להמשך ניתוח במורד הזרם.

ביום החמישי לאחר ההזרקה, הוציאו את העוברים מהאינקובטור ובדקו ואתרו את ה-CAMs של העובר להפצת מושבה