אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:24 דק׳ • April 30th, 2023
הלשון מהווה אפיתל קשקשי מרובד ושכבה תחתונה של רקמת חיבור צפופה הנקראת למינה פרופריה. האפיתל מורכב מתאי אפיתל קשקשיים רב שכבתיים המספקים הגנה מפני לחץ מכני.
כדי לבודד תאי אפיתל, התחל עם לשון עכבר שזה עתה נקטפה. טחנו את הלשון כדי לקבל שברי רקמות קטנים יותר. לאחר מכן, טפל בשברים עם קוקטייל עיכול מותאם אישית המכיל אנזימים קולגנאז, היאלורונידאז ודאוקסיריבונוקלאז.
אנזימי קולגנאז והיאלורונידאז מעכלים את המטריצה החוץ-תאית המחזיקה את הרקמה יחד, ומקדמים שחרור של תאים בודדים לתרחיף. דאוקסיריבונוקלאז משפיל כל DNA חופשי המשתחרר מתאים ליזים.
הוסף מאגר המכיל סרום לדגימה המעוכלת כדי לנטרל את האנזימים ההידרוליזה של החלבון. כעת, סנן את הדגימה דרך מסנני תאים כדי להסיר כל שברי רקמה ופסולת לא מעוכלים ולקבל השעיה חד-תאית של תאי אפיתל.
צנטריפוגה להפרדת התאים. השליכו את הסופרנטנט המכיל את תערובת העיכול. השעו מחדש את גלולת התא במדיה טרייה. לבסוף, העבירו את הנפח הרצוי של תרחיף תאים זה לכלי תרבית סטרילי. דגרו על התרבות.
תאי האפיתל נצמדים למשטח התחתון של צלחת התרבות. בהתאם ליכולת ההתפשטות של תאי אפיתל בודדים, הם מתחילים ליצור מושבות.
התחל בשימוש במספריים כירורגיים כדי לקצור את הלשון מעכבר טרנסגני B6 זכר או נקבה בן 6 שבועות. השתמש באזמל כדי לטחון את הרקמה לשברים קטנים מאוד ולאסוף את החלקים לתוך צינור של 15 מיל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים