אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:53 דק׳ • April 30th, 2023
טיפול מקדים בקטעי רקמה משובצים בפרפין קבוע בפורמלין או FFPE מקל על החשיפה של חומצות גרעין ומאפשר קשירה של בדיקות מסומנות לרצף המטרה במהלך הכלאה באתר. בנוסף, טיפול מקדים מסייע בשמירה על שלמות חומצות הגרעין בתוך התאים ועל המורפולוגיה הכללית של הרקמות.
כדי להתחיל, קח מגלשת זכוכית הנושאת קטע מעניין של רקמת FFPE נטולת פרפין ומיובשת. טפל ברקמה בריכוז מתאים של מי חמצן ודגירה.
מי חמצן משביתים באופן בלתי הפיך את הפרוקסידאז האנדוגני, הקיים פיזיולוגית בתאים. תהליך חסימה זה מבטל את האפשרות של אותות רקע לא ספציפיים במהלך שלבי ההכלאה הבאים.
לאחר מכן, טבלו את חלק הרקמות באמבטיה מחוממת המכילה מאגר אחזור אנטיגן מתאים. דגירה למשך הזמן הרצוי. טמפרטורה גבוהה מבקעת קישורים כימיים המושרים על ידי קיבוע בחלבונים וחומצות גרעין, וחושפת את האפיטופים ללא מסכה לבדיקות במהלך התיוג שלאחר מכן.
לבסוף, טפל בדגימה בתמיסת פרוטאז מתאימה. דגירה בסביבה מבוקרת לחות. פרוטאזות מגבירות את הנגישות של RNA, ומאפשרות לבדיקות הספציפיות להגיע לרצף היעד שלהן בשלבי ההכלאה הבאים.
שטפו את החלק במים כדי להסיר שאריות פרוטאזות. השתמש בקטע הרקמה המטופל מראש להכלאה כרומוגנית של RNA באתר.
כדי לחסום את פעילות הפרוקסידאז בשקופיות עם קטעי רקמה שעברו דה-פרפין בעבר והונחו במדף שקופיות, הוסיפו 4 עד 6 טיפות, מספיק כדי לכסות את הדגימה, של מי חמצן
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים