הטמעת ספרואידים תלת ממדיים בטיפות ג'ל אגרוז: טכניקה לשימור ספרואידים לניתוח במורד הזרם

ספרואידים הם אגרגטים תאיים כדוריים תלת מימדיים במבחנה המחקים את המיקרו-סביבה של הגידול in vivo ועוזרים לחקור את התקדמות הגידול. כדי לשמר את הספרואידים הללו על ידי הטמעה, התחל בלקיחת צינור סטרילי המכיל ספרואידים במאגר רצוי.

טפל בספרואידים עם פרפורמלדהיד. פרפורמלדהיד מקשר בין חלבונים תאיים, וכתוצאה מכך מייצב ומשמר את מבנה התא. צנטריפוגה את הספרואידים והסר את הסופרנטנט המכיל פרפורמלדהיד. השעו מחדש את הכדור הכדורי במאגר.

לאחר מכן, הכינו את הריכוז הרצוי של תמיסת ג'ל אגרוז מותכת. הכינו טיפת ג'ל אגרוז על שקופית מיקרוסקופ. שמור את המגלשה על גוש חימום כדי למנוע התמצקות של אגרוז.

בעזרת מיקרופיפטה עם קצה פתח רחב, אספו את הכדורים מהצינור. פיפטה בזהירות את הספרואידים למרכז טיפת ג'ל האגרוז מבלי לגעת בשקופית המיקרוסקופ. לאחר מכן, דגרו את המגלשה בטמפרטורה מתאימה כדי לאפשר ל-ECM להתמצק וללכוד את הספרואידים שבתוכה.

העבירו בעדינות את הטיפה המוצקה למחצה משקופית המיקרוסקופ לקלטת טישו. אחסן את הספרואידים המוטבעים באתנול עד לניתוח נוסף במורד הזרם.

כדי להתחיל, תקן את הספרואידים במכסה אדים ביום הראשון כמתואר בפרוטוקול הטקסט. ביום השני, הכניסו את ג'ל האגרוז לכוס מלאה במים במיקרוגל כדי לחמם אותו, ושמרו על הג'ל חם על צלחת חימום ספסל שהוגדרה ל-60 מעלות צלזיוס עד הצורך.

שטפו את הספרואידים פעמיים במכסה האדים באמ