אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:22 דק׳ • April 30th, 2023
כרסום קריוגני או קריוטחינה היא טכניקה המאפשרת לקרר דגימות רקמה נטולות תאים לטמפרטורות נמוכות במיוחד ולטחון לאבקה דקה תוך שמירה על ההרכב הביוכימי שלהן.
כדי להתחיל, השג מטריצה חוץ-תאית נטולת תאים שמקורה ברקמה ליופילית או ECM מעניינים. טוחנים אותו כדי להשיג שברים קטנים.
לאחר מכן, העבירו את שברי ה- ECM הטחונים לצנצנת טחינה. הכניסו כדורי טחינה לצנצנת הטחינה. טבלו את צנצנת הטחינה העמוסה בחנקן נוזלי כדי להקפיא את הדגימה בטמפרטורה של -196 מעלות צלזיוס.
טען את הצנצנת המקוררת למערכת קריורמילינג. הכניסו את הדגימה הקפואה להקפאה בתדירות מתאימה למשך הזמן הרצוי.
במהלך קריוטליה, צנצנת הטחינה מתנדנדת באופן רדיאלי במצב אופקי. כתוצאה מכך, האינרציה של כדורי הטחינה מאפשרת להם להשפיע על הדגימה הקפואה באנרגיה גבוהה בקצוות המעוגלים של הצנצנת ולכתוש אותה.
בנוסף, תנועת צנצנת הטחינה יחד עם תנועת כדורי הטחינה מקדמת ערבוב אינטנסיבי של הדגימה לקבלת אבקה דקה עם התפלגות אחידה של גודל החלקיקים.
כעת, העבירו את אבקת ה-ECM המוקפאת לבקבוקון זכוכית. אטום היטב את הבקבוקון כדי למנוע חשיפה ללחות. לייבש את הדגימה עד לשימוש נוסף.
השתמש במספריים כירורגיים חדים כדי לטחון דק את הרקמה הנטולת תאים. כדי להקפיא את הרקמה המעובדת, מלאו תא כרסום נירוסטה בנפח 25 מיליליטר למערכת טחינת כדורים במעבדה ב-ECM טחון ליופיליזציה והוסיפו שני כדורי כרסום מנירוסטה בקוטר 10 מילימטר.
סגור וטבול לחלוטין את תא הטחינה הטעון בחנקן נוזלי למשך 3 דקות. לאחר מכן, טוחנים את הדגימה הקפואה בחום של 30 הרץ למשך 3 דקות. חזור על הטבילה בחנקן נוזלי והטחינה עד שה-ECM נטחן לאבקה דקה.