הכנת השעיית ECM: טכניקה להשגת תרחיף הומוגני ממטריצה חוץ-תאית שמקורה ברקמה

מטריצה חוץ-תאית או ECM, רשת תמיכה מורכבת ברקמות, מורכבת מפרוטאוגליקנים וחלבונים.

כדי להשיג ECM הומוגני, התחל בלקיחת כמות מדודה של אבקת ECM נטולת תאים בשפופרת. כעת, הוסף חיץ מחומצן לצינור ליצירת תרחיף ECM.

במקביל, בצינור אחר, ממיסים אלפא-עמילאז - אנזים גליקוליטי - באותו מאגר מחומצן. ה-pH החומצי של חוצץ זה מקל על הפעילות האופטימלית של האנזים אלפא-עמילאז.

לאחר מכן, השלימו את השפופרת המכילה תרחיף ECM בתמיסת אנזים אלפא-עמילאז. דגרו את הצינור בתסיסה מתמדת. אלפא-עמילאז מבצע הידרוליזה של הגליקנים - חלקיקי הפחמימות - הקיימים בפרוטאוגליקנים.

צנטריפוגה כדי לגלול את מקטע ה-ECM העשיר בחלבון, ומשאיר את הגליקנים המעוכלים והאנזימים המושקעים בסופרנטנט. השליכו את הסופרנטנט.

השעו מחדש את הגלולה בתמיסת נתרן כלורי. יוני הכלוריד מחלצים את החלבונים מכדור ה-ECM לתוך התרחיף. צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט המכיל נתרן כלורי.

לאחר מכן, הוסף חומצה אצטית לגלולת ECM המכילה חלבון. חומצה אצטית מסיסה עוד יותר את אגרגטים של חלבון ECM ומביאה אותם בתרחיף.

השתמש בהומוגנייזר כדי להשיג מתלה ECM אחיד. אחסן את מתלה ה-ECM ההומוגני ב-4 מעלות צלזיוס להמשך ניתוח במורד הזרם.

שקלו 250 מיליגרם של ECM טחון או קריוטלי והעבירו אותו לצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר. הוסף 5 מיליליטר של מאגר NaH₂PO₄ מולארי 0.22 לצינור הצנטריפוגה וסמן את