ייצור קצף חוץ-תאי באמצעות ליופיליזציה: הליך ליצירת פיגומים ביולוגיים מ-ECM של רקמות דה-צלולריות

קצף שמקורו ב- ECM הם פיגומים נקבוביים מאוד המתקבלים באמצעות המטריצה החוץ-תאית - מרכיב לא תאי במיקרו-סביבת הרקמות.

כדי לייצר קצף שמקורו ב-ECM, התחל בנטילת תרחיף הומוגני של אבקת ECM דקה במיוחד בשפופרת. דגרו את המתלה בטמפרטורה חמה עם תסיסה מתמדת כדי למנוע גוש ECM.

לאחר מכן, בעזרת מזרק, העבירו את מתלה ה- ECM הנוזלי לתבנית הרצויה. מקררים את התבנית למשך הלילה כדי שה-ECM יתמצק. ה-ECM מתמצק ליצירת מבנה רשת תלת מימדי.

לבסוף, הנח את התבנית המכילה ECM המוצקה לתוך בקבוק ליופילייזר. חבר את הבקבוק למערכת מייבש הקפאה. בתוך הליופילייזר, הדגימה נתונה לטמפרטורה קרה במיוחד ולחץ נמוך. התוצאה היא היווצרות גבישי קרח בחללי הביניים של רשת ECM.

בבוא העת, הלחץ והטמפרטורה של הליופילייזר עולים בהדרגה. תנאים אלה מקלים על סובלימציה - תהליך בו המוצק הופך ישירות לצורתו הגזית במקום לעבור התכה.

האדים הגזיים מתאדים, משאירים אחריהם חללים ריקים בתוך רשת ה-ECM, ובכך יוצרים פיגום נקבובי שמקורו ב-ECM.

דגרו את מתלה ה-ECM ב-37 מעלות צלזיוס עם תסיסה מתמשכת ב-120 סל"ד עד שהמתלה חם. לאחר מכן, השתמש בחומצה אצטית מולרית 0.2 כדי לדלל את תרחיף הדגימה לריכוז הרצוי. בעזרת מזרק 3 מיליליטר ומחט 18G, מלאו את התבנית הרצויה במתלה ECM.

ניתן לייצר קצף במגוון גיאומטריות בהתאם לצורת התבנית. מכסים ומקפיאים את התבניות במינוס 20 או מינוס 80 מעלות. לאחר מכן, מניחים את התבניות בבקבוק ליופילייזר. חבר את הבקבוק למערכת מייבש ההקפאה במעבדה וייבש את התבניות למשך 24 שעות או עד לייבוש מלא.