הקמת מודל תלת-ממדי של תרבית משותפת של גרעיני שורש מורין דורסלי ותאים סרטניים: מודל במבחנה לחקר פלישת תאי סרטן פריעצביים

פלישה פרינוירולית או PNI מתייחסת לנדידה של תאים סרטניים לאורך העצבים ופלישתם לאחר מכן לפרינוריום - מיקרו-סביבה מתאימה לצמיחת סרטן וגרורות.

כדי לחקות PNI במבחנה, התחל בהוספת טיפה של מטריצה חוץ-תאית או תרחיף ECM על צלחת תרבית כך שהיא תקבל צורה של חצי כדור. כעת, דגרו את צלחת התרבות כדי לחזק את התכונות המבניות והפונקציונליות של פיגום התלת מימד.

לאחר מכן, הניחו בזהירות גנגליון שורש גבי שנקטף מראש או DRG, מקבץ של נוירונים חושיים, במרכז טיפת ה-ECM המוצקה למחצה. דגירה כדי להטמיע את ה-DRG בתוך טיפת ה-ECM.

לאחר מכן, הוסף מצע גידול מתאים ודגר. ה-ECM בתוספת החומרים המזינים מעודד הנבטה של DRG לבליטות עצביות קטנות הנקראות נויריטים הגדלים באופן רדיאלי לכיוון היקף הטיפה.

הסר את המדיום המושקע כדי להכין את טיפת ה-ECM לבדיקה הבאה. זרעים צבועים פלואורסצנטיים בתאי סרטן דבקים מעל הטיפה. בשל הצורה החצי כדורית, תאי סרטן מתגלגלים ומתיישבים לאורך פריפריה הטיפתית.

דגרו את צלחת התרבית כדי לאפשר אינטראקציה בין תא סרטני לנויריט. כאשר מסתכלים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ניתן לראות את תאי הסרטן עוקבים לצד הנויריטים ונודדים לעבר ה-DRG, מה שמאשר פלישה פרינוירולית.

כדי להכין את טיפות המטריצה המוצקות למחצה, העבירו צלחת זכוכית תחתונה אחת מקרח על גוש קרח מתחת למיקרוסקופ ההפעלה. הניחו את קצה הפיפטה של לא יותר מ-10 מיקרול