אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:22 דק׳ • April 30th, 2023
גידול מכיל חלק קטן של תאים דמויי גזע הידועים כאוכלוסיית הצד. תאים אלה עמידים לכימותרפיה, מה שהופך אותם לאחראים להישנות הסרטן.
כדי לבודד את אוכלוסיית הצד של תאים סרטניים, התחל בהוספת Hoechst - תמיסת צבע פלואורסצנטית - לבקבוקון המכיל תרחיף תאים סרטניים. בתוך תאי סרטן רגילים, מולקולות הוכסט נכנסות לגרעין ונקשרות לאזור העשיר ב-A-T ב-DNA, מה שמוביל לפלואורסצנטיות גבוהה בתאים אלה.
לעומת זאת, אוכלוסיית הצד מכילה ריכוז גבוה של טרנספורטרים ABC - משאבות פליטה המסירות במהירות את מולקולות הצבע מהתא. השטף הפעיל הזה של מולקולות צבע גורם לאוכלוסיית הצד לזרוח בעוצמה נמוכה.
כעת, קחו בקבוקון נוסף של תאים סרטניים שטופלו על ידי הוכסט והוסיפו לו ורפמיל. בקבוקון זה משמש כבקרה מכיוון ש-Verapamil חוסם את מובילי ה-ABC. שלב זה גורם להפחתה בפליטת הוכסט ושומר על הצבע בתוך תאי האוכלוסייה הצדדית.
לאחר מכן, צבעו את התאים בשני הבקבוקונים באמצעות פרופידיום יודיד. פרופידיום יודיד נכנס אך ורק לגרעין התאים המתים ומשתלב בין בסיסי ה-DNA. זה מוביל לפלואורסצנטיות גבוהה בתאים המתים.
לבסוף, מיין את התאים באמצעות ממיין תאים המופעל על ידי פלואורסצנטי או FACS. FACS מפריד בין תאי גידול פלואורסצנטיים מאוד, השומרים על Hoechst ותאים מתים מתאי אוכלוסיית הצד הפלואורסצנטיים הנמוכים.
כדי לבחור אוכלוסיית צד של תאים דמויי גזע סרטניים ע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים