מתיל תיאזוליל טטרזוליום או בדיקת MTT: בדיקה קולורימטרית למדידת עמידות לתרופות באמצעות קביעת פעילות מטבולית בתאים סרטניים

בדיקת מתיל תיאזול טטרזוליום או MTT מאפשרת הערכת כדאיות תאים על סמך מדידת הפעילות המטבולית התאית.

כדי להתחיל בבדיקה, הכינו טווח של ריכוזים הולכים וגדלים של התרופה המעניינת. הוסף נפחים שווים של ריכוזי התרופות השונים לבארות של צלחת מרובת בארות.

לאחר מכן, פיפטה תרחיף של תאי סרטן הורים רצויים רגישים לתרופות והגרסאות העמידות לתרופות שלהם במדיה מתאימה, כל אחד לקבוצה של בארות המכילות ריכוזי תרופות שונים. דגרו את הצלחת.

בתרבית, תאי הסרטן הרגישים לתרופות רגישים למולקולות התרופה, מה שמוביל למוות של תאים גם בריכוזים נמוכים. נהפוך הוא, תאי הסרטן העמידים לתרופות אינם רגישים למולקולות התרופה, מה שמקל על הישרדותם והתפשטותם גם בריכוזי תרופות גבוהים יותר.

טפלו בתאים בתמיסת MTT ודגרו. MTT, מלח טטרזוליום בעל מטען חיובי, חודר בקלות לתאים הפעילים מבחינה מטבולית. בתוך תאים אלה, אנזימי אוקסידורדוקטאז תלויי NAD(P)H מפחיתים את מלח ה-MTT לגבישי פורמאזאן בלתי מסיסים במים, המועברים אל פני התא.

כעת, הוסף פתרון מסיס מתאים לבארות. מערבבים היטב כדי להמיס את גבישי הפורמזן לתמיסה צבעונית. לבסוף, השתמש בקורא מיקרו-פלטות כדי למדוד את ספיגת התמיסה הצבעונית, המעידה על פעילות מטבולית תאית.

הבארות המכילות תאי סרטן עמידים לתרופות מציגות עוצמת צבע גבוהה יותר, מה שמרמז על כדאיות תאים מוגברת בהשוואה לתאי סרטן רגישים לתרופות.