הכנת פיגום ושט חזירי נטול תאים: טכניקה ליצירת פיגום אצלולרי מוושט חזיר

פיגומים נטולי תאים שמקורם במטריצה החוץ-תאית של רקמה ספציפית מחקים את המיקרו-סביבה החוץ-תאית הטבעית שלהם. פיגומים אלה שומרים על שלמותם המבנית וההרכב הביוכימי ומשמשים פלטפורמות מבטיחות להנדסת רקמות.

להכנת פיגום וושט חזירי נטול תאים, התחל עם וושט חזיר טרי שנכרת. חצו את הוושט לאורך ושטפו אותו עם חיץ מתאים כדי להסיר פסולת. לאחר מכן, אבטח את הוושט עם פני הרירית שלו, השכבה הפנימית ביותר, פונה כלפי מעלה.

הפרד את הרירית מהתת-רירית הבסיסית בקצה אחד של הוושט. נתח את הוושט לאורך רקמת החיבור הרופפת של הרירית הנקראת lamina propria כדי להפריד לחלוטין את פני הרירית מהתת-רירית הבסיסית.

יתר על כן, כרתו את האזורים הפרוקסימליים והדיסטליים של הרירית, המכילים צפיפות גבוהה יותר של בלוטות תת-ריריות ושכבת למינה פרופריה עבה יותר. חותכים את רקמת הרירית לחתיכות בגודל אחיד.

טפל ברקמה בתמיסת מלח היפרטונית בתוספת אנטיביוטיקה. אנטיביוטיקה מסייעת במניעת צמיחת חיידקים. בריכוז מומס גבוה, מים יוצאים מהתאים וגורמים להתכווצותם. שלב זה מסייע עוד יותר במוות תאי ובניתוק מהמטריצה החוץ-תאית.

כעת, נתק בעדינות את האפיתל המשוחרר מהרקמה הבסיסית. שטפו את הטישו עם בופר כדי להסיר פסולת תאית. לבסוף, דגרו את הרקמה בגליצרול, מה שמקל עוד יותר על דה-סלולריזציה של רקמות על ידי ייבוש ולייזציה של תאים תוך שמירה על שלמות קרום הבסיס.

כדי להכין את פיגומי הוושט של חזיר ללא תאים, התחל באמצעות מספריים וזוג פינצטה כדי לחתוך את הוושט של חזיר לאורך. לאחר מכן, שטפו את הוושט בסיר סטרילי של 180 מיליליטר המכיל 100 מיליליטר PBS סטרילי למשך 10 דקות עם ניעור עדין להסרת פסולת.

בזמן שטיפת הרקמה, יש לרסס לוח חיתוך פקק עם 70% אתנול. כאשר הפקק יבש, הצמד את הוושט ללוח כשהצד הרירי כלפי מעלה. כעת, השתמשו בפינצטה סטרילית כדי לתפוס את פני השטח הריריים בקצה אחד של הוושט ולמשוך את הרקמה הרחק מהלוח כדי להפריד את הרירית מהתת-רירית שמתחתיה.

לאחר מכן, בעזרת להב אזמל סטרילי, חתכו את הוושט לאורך הלמינה פרופריה, והסירו את הסיכות ככל שהדיסקציה מתקדמת כדי לאפשר להרים את הרירית. השליכו את תת-הרירית הבסיסית, והשתמשו באזמל כדי לחתוך את הרירית הנותרת לחתיכות מרובעות של 5 סנטימטרים. שוטפים את החלקים ב -150 מיליליטר PBS סטרילי בתסיסה עדינה כפי שהודגם זה עתה.

לאחר חמש דקות, העבירו את הרקמה לסיר של 180 מיליליטר המכיל 150 מיליליטר של תמיסת נתרן כלוריד טוחנת אחת בתוספת אנטיביוטיקה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר 72 שעות, העבירו את הרקמה ל -150 מיליליטר של PBS סטרילי, ובשלב זה האפיתל יתחיל להיפרד באופן גלוי מהרקמה הבסיסית.

השתמש במלקחיים סטריליים ובלהב אזמל כדי להסיר את האפיתל המתנתק, והניח את הרקמה הנותרת בסיר טרי של 150 מיליליטר PBS סטרילי עם שלוש שטיפות של חמש דקות עם תסיסה עדינה. כעת יש לאחסן את הרקמה בגליצרול למשך ארבעה חודשים לפחות כדי לעקר את הפיגום במלואו.