מיצוי אקסוזום מגנטי מבוסס חרוזים: טכניקה לבידוד אקסוזומים ספציפיים מנוזלים ביולוגיים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:03 דק׳ • April 30th, 2023
אקסוזומים הם מבנים שלפוחיתיים חוץ-תאיים המופרשים על ידי תאים לביו-נוזלים. כדי ללכוד אקסוזומים ספציפיים מנוזלים ביולוגיים, התחל בלקיחת חרוזים מגנטיים מצופים סטרפטווידין בשפופרת.
לצינור זה, הוסף נוגדנים אנטי אנושיים ביוטיניליים. לביוטין הקיים על הנוגדנים יש זיקה גבוהה לסטרפטווידין הקיים על החרוזים המגנטיים. התוצאה היא צימוד של הנוגדנים עם החרוזים המגנטיים.
לאחר מכן, הוסף תמיסת חסימה עשירה בחלבון לצינור המכיל את החרוזים המגנטיים המסומנים בנוגדנים. החלבונים בתמיסת החסימה נקשרים לאתרים החופשיים על החרוזים המגנטיים ומגבירים את הספציפיות של קשירת האקסוזום.
כעת, השלימו את הצינור עם דגימת נוזל ביולוגי עשיר באקסוזומים. דגרו את הצינור בתסיסה. האקסוזומים בנוזל הביולוגי מציגים קולטנים ספציפיים על פני השטח, המסייעים להם להיקשר לנוגדנים המחוברים לפני השטח של חרוזים מגנטיים.
לאחר מכן, הנח את הצינור בשדה מגנטי. בהשפעת שדה מגנטי, החרוזים המגנטיים הקשורים לאקסוזום נצמדים לפני השטח של הצינור. לאחר מכן, בעזרת מיקרופיפטה, שאפו את הנוזל הביולוגי שנותר מהצינור.
לבסוף, הסר את הצינור מהשדה המגנטי והוסף מאגר מתאים כדי לחסל את החרוזים הקשורים לאקסוזום. ניתן להשתמש בחרוזים הקשורים לאקסוזומים אלה לניתוח נוסף במורד הזרם.
השעו מחדש תמיסת מלאי המכילה 10 מיקרוגרם למיליליטר של מיקרו-חלקיקים מגנטיים מצופים סטרפטווידי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים