מיצוי אקסוזום מגנטי מבוסס חרוזים: טכניקה לבידוד אקסוזומים ספציפיים מנוזלים ביולוגיים

0 צפיות4:03 דק' • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אקסוזומים הם מבנים שלפוחיתיים חוץ-תאיים המופרשים על ידי תאים לביו-נוזלים. כדי ללכוד אקסוזומים ספציפיים מנוזלים ביולוגיים, התחל בלקיחת חרוזים מגנטיים מצופים סטרפטווידין בשפופרת.

לצינור זה, הוסף נוגדנים אנטי אנושיים ביוטיניליים. לביוטין הקיים על הנוגדנים יש זיקה גבוהה לסטרפטווידין הקיים על החרוזים המגנטיים. התוצאה היא צימוד של הנוגדנים עם החרוזים המגנטיים.

לאחר מכן, הוסף תמיסת חסימה עשירה בחלבון לצינור המכיל את החרוזים המגנטיים המסומנים בנוגדנים. החלבונים בתמיסת החסימה נקשרים לאתרים החופשיים על החרוזים המגנטיים ומגבירים את הספציפיות של קשירת האקסוזום.

כעת, השלימו את הצינור עם דגימת נוזל ביולוגי עשיר באקסוזומים. דגרו את הצינור בתסיסה. האקסוזומים בנוזל הביולוגי מציגים קולטנים ספציפיים על פני השטח, המסייעים להם להיקשר לנוגדנים המחוברים לפני השטח של חרוזים מגנטיים.

לאחר מכן, הנח את הצינור בשדה מגנטי. בהשפעת שדה מגנטי, החרוזים המגנטיים הקשורים לאקסוזום נצמדים לפני השטח של הצינור. לאחר מכן, בעזרת מיקרופיפטה, שאפו את הנוזל הביולוגי שנותר מהצינור.

לבסוף, הסר את הצינור מהשדה המגנטי והוסף מאגר מתאים כדי לחסל את החרוזים הקשורים לאקסוזום. ניתן להשתמש בחרוזים הקשורים לאקסוזומים אלה לניתוח נוסף במורד הזרם.

השעו מחדש תמיסת מלאי המכילה 10 מיקרוגרם למיליליטר של מיקרו-חלקיקים מגנטיים מצופים סטרפטווידין, והוסיפו 5 מיקרוליטר מהתמיסה לצינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל 495 מיקרוליטר PBS. כדי לשטוף את החרוזים, ראשית, הניחו את הצינור על מתלה מגנטי למשך דקה אחת והסירו בזהירות את המאגר מבלי להפריע לחרוזים.

לאחר מכן, העבירו את הצינור למתלה לא מגנטי. הוסף 500 מיקרוליטר PBS ופיפטה כדי לשטוף את החרוזים. עשה זאת בסך הכל שלוש פעמים. לאחר הכביסה האחרונה, השעו מחדש את החרוזים ב-490 מיקרוליטר PBS ולאחר מכן הוסיפו 5 מיקרוליטר של נוגדן CD63 אנטי-אנושי לעכבר ביוטיניל מתמיסת מלאי של 1 מיליגרם למיליליטר.

מערבבים את התמיסה על ידי פיפטה. תכנת מסובב לדוגמה לסיבוב הדדי ב-90 מעלות למשך 5 שניות ורטט ב-5 מעלות למשך שנייה אחת. הנח את הצינורות במסובב והפעל את התוכנית למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, העבירו את הצינורות למתלה המגנטי למשך 5 דקות. שטפו את החרוזים שלוש פעמים עם 500 מיקרוליטר PBS ולאחר מכן השעו אותם מחדש ב-490 מיקרוליטר PBS המכילים קזאין. סמן צינור עם זיהוי הדגימה ולאחר מכן הוסף 10 מיקרוליטר מהדגימה.

פיפטה מספר פעמים כדי לערבב את הדגימה עם החרוזים המצומדים בנוגדנים. לאחר מכן, העבירו את הצינורות למסובב הדגימה והפעילו את אותה תוכנית למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו את החרוזים שלוש פעמים עם 500 מיקרוליטר של מאגר טריס-הידרוכלוריד 1M באמצעות המתלה הממוגנט. האקסוזומים קשורים כעת לחרוזים הממוגנטים.

09:43

בידוד ואפיון של RNA המכיל Exosomes

סרטונים קשורים

0 צפיות

05:05

שיטת ממטרים השתנה לבודד השתן Exosomes

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:22

עיכול חלבון אולטראפילטרציה, גודל אי-הכללה של כרומטוגרפיה כדי למטב את ניתוקה של Exosomes פלזמה דם אנושי, סרום

סרטונים קשורים

0 צפיות

04:21

בידוד אקסוזום: טכניקה להפרדת אקסוזומים מהפלזמה של חולי סרטן ריאות מסוג תאים לא קטנים

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:45

טיהור וmicroRNA פרופיל של Exosomes נגזר מדיה דם ותרבות

סרטונים קשורים

0 צפיות

11:38

שיטה חדשנית לExosome כימות ומדידה גודל

סרטונים קשורים

0 צפיות

11:02

איתור של Exosomal ביומרקר על ידי שחרור מושרה שדה חשמלי ומדידה (EFIRM)

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:59

בידוד Profiling של MicroRNA המכיל Exosomes מן האדם מר

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:59

הכנה של Exosomes siRNA מסירה תאים סרטניים

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:30

שימוש Nanoplasmon-משופרת פיזור מיקרוסקופ נמוך הגדלה הדמיה כדי לכמת הגידול הנגזר בגידולים

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026