אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:32 דק׳ • April 30th, 2023
עבור קרצינומה של תאי אורותל שמקורו בחולה או יצירת מודל עכבר UCC, עכבר מדוכא חיסון מחוסן בתאי UCC אנושיים כדי לחקור את התקדמות הסרטן וגרורות.
כדי להתחיל בהשתלת זרים, קח עכברה מורדמת מדוכאת חיסון. גלח את הגב התחתון של העכבר כדי לחשוף את אזור האגן שלו. כעת, הנח את העכבר במצב שכיבה עם עורו החשוף במגע עם כרית פיזור המשמשת כאלקטרודת הארקה להשלמת המעגל במהלך גירוי חשמלי.
לאחר מכן, קח אנגיוקטטר, צינור חלול דק, המחובר לחוט מנחה. יש לשמן את פני השטח של הצנתר ולהכניס אותו לשופכה של העכבר כדי לגשת לשלפוחית השתן שלו. הנח אלקטרודה פעילה על חוט ההנחיה כדי לעורר את דופן שלפוחית השתן. הליך זה מסייע לקרוע את שכבת המוקופוליסכריד, מחסום מגן של רירית שלפוחית השתן, ומסייע בהשתלטות לאחר מכן של תאי גידול.
כעת, הסר בעדינות את מכלול חוט ההנחיה אנגיוקטטר מהשופכה. קח אנגיוקטטר שני המחובר למזרק המכיל את תרחיף תאי UCC והכנס אותו לשופכה של העכבר. הזרקו את תאי ה-UCC לשלפוחית השתן של העכבר. תאי סרטן מקיימים אינטראקציה עם רירית שלפוחית השתן ויוצרים גידול שעלול בסופו של דבר להתפשט לרקמות ואיברים אחרים.
כדי להכין את בעל החיים להזרקת תאי UCC, השתמש בקרם להסרת שיער כדי לגלח את הגב התחתון של עכבר NOD/SCID נקבה בת 6 עד 8 שבועות. כדי לתת תאי UCC לשלפוחית השתן, ראשית, הגדר מכונת צריבה חשמלית חד-קוטבית בהספק של 4 וואט. לאחר הרדמת העכבר, הנח אותו במצב שכיבה עם חוטמו בחרוט אף איזופלורן וגב חשוף מקורקע היטב על אלקטרודה מפזרת.
יש לשמן אנגיוקטטר בגודל 24 עם ג'לי סיכה ולאחר מכן להכניס את האנגיוקטטר בעדינות אך בחוזקה דרך שופכת העכבר. אם הצנתר מתכופף בכניסה, הכנס את חוט ההנחיה באמצע הדרך לתוך הצנתר כדי לספק יציבות. לאחר מכן, הכנס במלואו את חוט ההנחיה הישר של הליבה הקבועה של 0.64 מילימטר 1 מילימטר מעבר לקצה האנגיוקטטר.
החזק את הסיכה החד-קוטבית לחוט ההנחיה למשך שנייה אחת, מה שמאפשר גירוי חשמלי של רירית שלפוחית השתן. חבר אנגיוקטטר סטרילי טרי למזרק Luer-Lok בנפח 1 מיליליטר ושאב עד 200 מיקרוליטר של תאי UCC. הסר את חוט ההנחיה והאנגיוקטטר מהשופכה ולאחר מכן הכנס אנגיוקטטר עם מזרק תאים המחובר אליו.
הזריקו 50 מיקרוליטר מהתאים לשלפוחית העכבר, וכדי לאפשר לתאים להיצמד לדופן שלפוחית השתן, המתינו מספר שניות לפני הסרת האנגיוקטטר. לבסוף, הסר את העכבר מחרוט האף האיזופלורן וכרית ההארקה והתבונן בו במשך שעה אחת לאחר ההליך לאיתור סימני מצוקה.