דגימת מיקרו-מיצוי בשלב מוצק: טכניקה מבוססת בדיקה לחילוץ דגימות מרקמות השתל

אחסון לטווח ארוך של שתל איברים משפיע על הפרופיל המטבולי שלו, המהווה אינדיקטור לתפקוד האיברים ולדחיית איברים בשלב מוקדם.

כדי לבודד את המטבוליטים הללו, התחל בנטילת מיקרו-מיצוי דק בשלב מוצק או בדיקת SPME המצופה בחומר סופג תואם ביולוגית. טבלו את הגשושית בתמיסת ניקוי הידרו-אלכוהולית כדי להרטיב את הספיגה המצופה ולשחרר את כל הזיהומים הקשורים.

מערבב את הגשושית כדי להסיר את הזיהומים. לאחר מכן, הנח את הגשושית בתמיסת הפעלה וערבב שוב. כימיקלים בתמיסת ההפעלה משנים את פני הבדיקה, ומשפרים את פוטנציאל הספיחה שלו. שוטפים את הגשושית במים ומעקרים אותה כדי להסיר מזהמים מיקרוביאליים.

כעת, הכנס את הגשושית הסטרילית והמופעלת לשתל האיבר כך שמטריצת הרקמות תכסה את כל פני השטח הסופגים. החומר הסופג מושך מטבוליטים קוטביים ולא קוטביים חופשיים מהשתל, ומאפשר ספיחה על פני השטח שלו. משוך את הגשושית ושטוף אותה במים כדי להסיר כל רקמה שנותרה.

לאחר מכן, הנח את הגשושית בתמיסת ספיגה, המקיימת אינטראקציה עם המטבוליטים הנספגים. לערבב את הגשושית כדי להפריד ולהמיס את המטבוליטים שנלכדו לתמיסת הספיגה. לבסוף, הסר את הגשושית ועבד את תערובת המטבוליטים המתקבלת לניתוח שלאחר מכן.

התחל בהכנת תערובת מיזוג מוקדם המורכבת מ-1 עד 1 מתנול ומים. הכניסו 1 מיליליטר מהתמיסה לכל בקבוקון זכוכית של 2 מיליליטר והניחו בדיקה אחת בכל בקבוקון. ערבב את הבקבוקונים על מערבולת מערבולת ב-1,200 סל"ד למשך שעה. לאחר מכן, שטפו את הבדיקות במים בדרגת LC-MS ועיקרו אותן על פי פרוטוקול העיקור הכירורגי הסטנדרטי או במחלקת עיבוד סטרילי.

כאשר מוכנים לחלץ את הדגימה, פתחו את האריזה הסטרילית והכניסו שתי בדיקות ישירות לקליפת הכליה למשך 10 דקות לכל נקודת זמן, וודאו שכל אורך הציפוי מכוסה על ידי מטריצת הרקמות. הקפד לעקוב אחר זמן הדגימה עבור כל בדיקה. החזר את הגשושית על ידי משיכתו החוצה מהרקמה ושטוף מיד את הציפוי במים בדרגת LC-MS כדי להסיר את כל הדם שנותר, והקפד לשטוף הרחק מאתר הניתוח.

כדי להעביר את הבדיקות, הניחו אותן בבקבוקונים נפרדים וסגרו אותן. לאחר מכן, הניחו את הבקבוקונים בקופסה מלאה בקרח יבש או בחנקן נוזלי. אחסן את הדגימות בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס או המשך מיד בספיגה.

הכן תמיסת ספיגה המורכבת מאצטוניטריל ומים לניתוח מטבולומי ואחרת המורכבת מאיזופרופנול ומתנול לניתוח ליפידומי. הוסף 100 מיקרוליטר מהתמיסה לתוספות בבקבוקונים המסומנים של 2 מיליליטר והנח בדיקה אחת בכל בקבוקון. מערבבים את הבקבוקונים ב-1,200 סל"ד למשך שעתיים. לאחר מכן, הסר את הבדיקות מהבקבוקונים והמשך בניתוח LC-MS.