הפקת פודוציטים בכליות אנושיות מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים: הליך להבחנה מכוונת של פודוציטים בוגרים בכליות מתאי גזע

ניתן לתכנת מחדש תאים בוגרים כדי להחזיר את מצבם דמוי תאי גזע, לא ממוין ומתפשט. תאים מתוכנתים מחדש אלה נקראים תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים או IPSCs. כדי להבדיל תאים פלוריפוטנטיים לתאים המתמחים בפודוציטים המעורבים בסינון פסולת מהכליות, התחל בנטילת השעיה של IPSCs אנושיים באמצעי אינדוקציה מזודרם.

העבירו את המתלה הזה על צלחת תרבית מצופה מטריצת מרתף ודגרו. מטריצת המרתף מקלה על הידבקות של IPSCs בבסיס. לאחר מכן, הגורמים הספציפיים הקיימים בתקשורת גורמים להתמיינות של IPSCs לתאי המזודרם, תאי המבשר לפודוציטים. לשאוף את המדיה המושקעת.

השלם את הצלחת בנפח הרצוי של אמצעי אינדוקציה מזודרם ביניים ודגירה למשך זמן ממושך. שלב זה מוביל להתמיינות של תאים מזודרמליים לפודוציטים לא בשלים. החלף את אמצעי האינדוקציה הבינוני של המזודרם בתמיסת טריפסין כדי לנתק את התאים הדבקים מהצלחת.

לאחר מכן, צנטריפוגה לגלולה של התאים. השליכו את הסופרנטנט המכיל תמיסת טריפסין ושברי מטריצה. השעו מחדש את הגלולה במדיום אינדוקציה לפודוציטים. העבירו את מתלה התאים לצלחת תרבית מצופה טרייה. דגירה כדי לאפשר התפתחות של מספר בליטות דמויות כף רגל מתאי ביניים, וכתוצאה מכך היווצרות פודוציטים בוגרים.

לאחר הספירה, השעו מחדש את התאים ל-1 פעמים 10 עד התאים החמישיים למיליליטר של ריכוז מדיום אינדוקציה מזודרם ושאבו את תמיסת המטריצה החוץ-תאית ממטריצת