Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
ניתן לתכנת מחדש תאים בוגרים כדי להחזיר את מצבם דמוי תאי גזע, לא ממוין ומתפשט. תאים מתוכנתים מחדש אלה נקראים תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים או IPSCs. כדי להבדיל תאים פלוריפוטנטיים לתאים המתמחים בפודוציטים המעורבים בסינון פסולת מהכליות, התחל בנטילת השעיה של IPSCs אנושיים באמצעי אינדוקציה מזודרם.
העבירו את המתלה הזה על צלחת תרבית מצופה מטריצת מרתף ודגרו. מטריצת המרתף מקלה על הידבקות של IPSCs בבסיס. לאחר מכן, הגורמים הספציפיים הקיימים בתקשורת גורמים להתמיינות של IPSCs לתאי המזודרם, תאי המבשר לפודוציטים. לשאוף את המדיה המושקעת.
השלם את הצלחת בנפח הרצוי של אמצעי אינדוקציה מזודרם ביניים ודגירה למשך זמן ממושך. שלב זה מוביל להתמיינות של תאים מזודרמליים לפודוציטים לא בשלים. החלף את אמצעי האינדוקציה הבינוני של המזודרם בתמיסת טריפסין כדי לנתק את התאים הדבקים מהצלחת.
לאחר מכן, צנטריפוגה לגלולה של התאים. השליכו את הסופרנטנט המכיל תמיסת טריפסין ושברי מטריצה. השעו מחדש את הגלולה במדיום אינדוקציה לפודוציטים. העבירו את מתלה התאים לצלחת תרבית מצופה טרייה. דגירה כדי לאפשר התפתחות של מספר בליטות דמויות כף רגל מתאי ביניים, וכתוצאה מכך היווצרות פודוציטים בוגרים.
לאחר הספירה, השעו מחדש את התאים ל-1 פעמים 10 עד התאים החמישיים למיליליטר של ריכוז מדיום אינדוקציה מזודרם ושאבו את תמיסת המטריצה החוץ-תאית ממטריצת קרום המרתף 2 צלחות מצופות. שטפו את הצלחות פעמיים במדיום חם וערבבו את תרחיף תאי הגזע הפלוריפוטנטיים המושרה על ידי בני אדם עם פיפטינג עדין.
הוסף 1 מיליליטר תאים לכל באר של מטריצת קרום המרתף צלחות 12 בארות מצופות 2 ונער בעדינות את הצלחות כדי להפיץ את התאים בצורה אחידה יותר. לאחר מכן, הנח את הצלחת בחממת תרבית התאים. בימים 2 עד 15 של ההתמיינות, החלף את מדיום האינדוקציה של המזודרם ב-1 מיליליטר של מדיום אינדוקציה מזודרם ביניים לכל באר.
אם נצפתה צמיחה משמעותית של תאים ודלדול מהיר של חומרים מזינים כפי שמצוין על ידי הצהבה של המדיום, ניתן להגדיל את נפח מדיום ההתמיינות הבינוני של המזודרם ל -1.3 מיליליטר לבאר. ביום ה-16 של התרבית, יש לשטוף את תאי המזודרם הבינוניים במדיום חם ולדגור את התאים עם 500 מיקרוליטר של 0.05% טריפסין-EDTA לבאר למשך 3 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
כאשר התאים מתחילים להתנתק, מגרדים את התאים בעזרת מרים תאים ומערבבים בעדינות את התאים על ידי פיפטינג. עצור את התגובה עם כ -2 מיליליטר תמיסת נטרול טריפסין לבאר והעביר את התאים לצינור חרוטי של 50 מיליליטר. הביאו את הנפח עד 50 מיליליטר עם מדיום ואספו את התאים באמצעות צנטריפוגה.
השעו מחדש את מדיום האינדוקציה של הגלולה והפודוציטים ב-1 כפול 10 לתאים החמישיים למיליליטר של ריכוז בינוני והוסיפו את התאים לצלחות מצופות 2 של מטריצת קרום המרתף. לאחר מכן, נערו בעדינות את הצלחת כדי לעזור לפזר את התאים בצורה אחידה יותר והניחו את התאים באינקובטור עד 5 ימים.
