אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:45 דק׳ • April 30th, 2023
תאי השריר החלק של דטרוזור, או DSM, הנמצאים בתוך דופן שלפוחית השתן מהווים את היחידה התפקודית העיקרית של שלפוחית השתן. תאים אלה נרגעים כדי להקל על אחסון השתן בשלפוחית השתן ומתכווצים כדי לשחרר את השתן.
כדי לבודד תאי DSM, התחל בלקיחת דגימת שלפוחית שתן אנושית שנקצרה. שטפו את הדגימה כדי להסיר עקבות של דם ופסולת. לאחר מכן, אבטח את הרקמה כשפני השטח הריריים שלה פונים כלפי מעלה. כרתו את השומן, כלי הדם ושכבת הרירית כדי לחשוף את שכבת שריר הדטרוזור הבסיסית. לאחר מכן, חותכים את הרקמה נטולת הרירית לשברים קטנים.
טפלו בשברי הרקמות בעזרת קוקטייל עיכול המכיל פפאין ודגירה. פפאין, אנזים פרוטאוליטי, מקדם את עיכול החלבונים במטריקס החוץ-תאי המחזיקים את התאים יחד ויוזם את התרופפות התאים במטריצה. כעת, הסר את הסופרנטנט המכיל פפאין.
הוסף תרחיף אנזים קולגנאז לשברי הרקמה ודגירה בטמפרטורה פיזיולוגית. קולגנאז מפרק את המטריצה החוץ-תאית ומקל על דיסוציאציה של תאי DSM. דגירה בטמפרטורה פיזיולוגית מסייעת בשמירה על שלמות תאי ה-DSM. השליכו את הסופרנטנט המכיל קולגנאז.
שטפו את שברי הרקמות עם חיץ קר כקרח כדי להסיר שאריות אנזימים. לאחר מכן, השעו אותם מחדש במאגר. יש לשלש בעדינות את שברי הרקמה שטופלו באנזים כדי להבטיח דיסוציאציה מוחלטת של כל התאים שלא שוחררו ולקבל השעיה חד-תאית של תאי DSM. אחסן את תאי ה-DSM בטמפרטורות נמוכות עד לשימוש נוסף.
התחל בבחינת דגימת שלפוחית השתן בעובי שלם. הצמד את הדגימה, הרירית פונה כלפי מעלה וסרוזה כלפי מטה, על צלחת עגולה מצופה סיליקון אננטיומר בגודל 150 מילימטר מלאה ב-DS קר כקרח, והסר בזהירות את כל הרירית על ידי דיסקציה חדה.
גזרו כמה שרירים חלקים ללא רירית או DSM. הנח 3 עד 6 חתיכות DSM לתוך שפופרת עם 1 עד 2 מיליליטר DS מחומם מראש המכיל פפאין ודיתיותרייטול או DS-P. דגרו אותם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 עד 45 דקות, והקפידו לנער את הצינור כל 10 עד 15 דקות.
לאחר הדגירה, הסר את ה-DS-P מהצינור ושטוף לזמן קצר את חלקי ה-DSM עם DS קר כקרח. העבירו את ה-DS עם חלקי ה-DSM לצינור חדש והוציאו את ה-DS, והשאירו את חלקי ה-DSM בתחתית הצינור. הוסף 1 עד 2 מיליליטר DS המכיל קולגנאז מסוג II או DS-C לצינור ודגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם טלטול מדי פעם.
השליכו את ה-DS-C ושטפו את חלקי ה-DSM שטופלו באנזים 5 עד 10 פעמים עם DS קר כקרח. לאחר הכביסה האחרונה, השאירו את ה-DS בתוך הצינור וטריטו בעדינות את החלקים בעזרת פיפטת פסטר מלוטשת באש כדי לשחרר תאי DSM בודדים.